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1、生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)(Experiment of Biopharmaceutics),2011-2012學(xué)年(1)學(xué)期,,中國(guó)藥科大學(xué),任課老師:魏元鋒weiyuanfengyuer@yeah.net,,,,,,,,,中國(guó)藥科大學(xué),小腸吸收實(shí)驗(yàn),,,,,,,,中國(guó)藥科大學(xué),,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?(1)掌握大鼠在體腸管回流的基本操作和方法;(2)通過藥物的大鼠在體腸管回流法實(shí)驗(yàn),求出藥物的吸收速率常數(shù)(K),半衰期(t 1/2)以及每小時(shí)吸收
2、率等。,,,,,儀器與藥品,,中國(guó)藥科大學(xué),(一)儀器1. 微量輸液器(蠕動(dòng)泵);2. 752型紫外可見分光光度計(jì);3. 恒溫水?。?. 紅外燈;5. 其它:搪瓷盤;10 mL離心管;移液管(50、5、2、1和0.5 mL),100 mL錐形瓶;燒杯(75和50 mL);注射器(20和1 mL);眼科剪刀;眼科鑷子;普通中號(hào)鑷子;小剪刀;手術(shù)刀片等。,,,,,儀器與藥品,,中國(guó)藥科大學(xué),(二)試劑1. 0.2%亞硝酸鈉;2
3、. 1%氨基磺酸銨;3. 0.2%津田試劑(用0.2%二鹽酸萘乙二胺代替)(以上置冰箱保存);4. 1 N HCl;5. 1 N NaOH;6. 生理鹽水;7. Krebs-Ringer磷酸緩沖液(pH 7.4):每1000 mL內(nèi)含7.8 g氯化鈉,0.35 g氯化鉀,0.37 g氯化鈣,1.37 g碳酸氫鈉,0.22 g磷酸二氫鈉,0.22 g氯化鎂,1.4 g葡萄糖;8. 戊巴比妥鈉溶液(10 mg/mL,大鼠每100
4、 g腹腔注射0.4 mL麻醉)。,,,,,儀器與藥品,,中國(guó)藥科大學(xué),(三)樣品1. 供試液(1 mg%SMZ)溶媒組成同Krebs-Ringer緩沖液。稱取SMZ 10 mg和酚紅20 mg后,加入少量蒸餾水混懸,加入碳酸氫鈉并微熱使溶解(必要時(shí)滴加數(shù)滴1 N NaOH液),得甲液。另將緩沖液的其它成分用蒸餾水溶解,得乙液。將甲液緩緩加入乙液中,添加適量蒸餾水至1000 mL,即得。2. 酚紅液(20 ?g/mL)溶媒組成同K
5、rebs-Ringer緩沖液。稱取酚紅20 mg。加入少量蒸餾水混懸,加入碳酸氫鈉并微熱使溶解(必要時(shí)滴加數(shù)滴1 N NaOH液),得甲液。另將緩沖液的其它成分用蒸餾水溶解,得乙液。將甲液緩緩加入乙液中,添加適量蒸餾水至1000 mL,即得。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 大鼠,200 g左右,,,,,實(shí)驗(yàn)原理,,中國(guó)藥科大學(xué),消化道主要包括胃、小腸和大腸(結(jié)腸),小腸又包括十二指腸、空腸和回腸。小腸最為突出的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是它具有非常巨大的上皮表面積,藥物
6、通過上皮吸收。小腸表面有環(huán)輪狀粘膜皺襞和絨毛突起,絨毛上還有許多微絨毛,大大增加了有效吸收表面積。由于被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)速度與表面積成正比,故小腸既是藥物吸收的主要部位(尤其是十二指腸),又是藥物主動(dòng)吸收的特殊部位。根據(jù)pH分配學(xué)說,對(duì)于以被動(dòng)擴(kuò)散機(jī)制吸收的藥物,未解離型(分子型,非離子型)的有機(jī)弱酸和有機(jī)弱堿易吸收,離子型則難以吸收。理論上弱酸性藥物從酸性溶液中(pH<pKa)的吸收好;而堿性藥物從堿性溶液中(pH>pKa)的吸收好。盡管如此
7、,大多數(shù)藥物仍可被小腸迅速吸收,這說明有效吸收表面積是決定吸收速度的主導(dǎo)因素。,,,,,實(shí)驗(yàn)原理,,中國(guó)藥科大學(xué),在體法不損傷研究部位的淋巴和循環(huán)系統(tǒng)而明顯優(yōu)于離體法。但由于腸道能吸收或排泄水分,導(dǎo)致供試液體積變化,可加入不被吸收的標(biāo)記物(如酚紅)來分析校正小腸水轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)藥物濃度的影響。,藥物腸吸收實(shí)驗(yàn)方法,在體實(shí)驗(yàn)法,離體實(shí)驗(yàn)法,腸回流法(2~5mL/min),單向腸灌流法(0.2~0.3ml/min),腸襻法,翻轉(zhuǎn)囊法,組織流通室法,
8、分離腸系膜法,細(xì)胞模型法,徐術(shù),劉忠良,胡晉紅.藥物腸吸收的實(shí)驗(yàn)研究方法概述.中國(guó)藥房,2009,20(16):1266-1268.翁榕安,李小曼.藥物小腸吸收常用方法比較.。醫(yī)學(xué)綜述,2009,15(2):269-270.,,,,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),一、大鼠稱重,計(jì)算給藥量,二、大鼠麻醉:將實(shí)驗(yàn)前一夜絕食的大鼠,按40 mg/kg(0.4 mL/100 g)戊巴比妥鈉量作腹腔注射麻醉(翻正反射消失),并背位固定于固定臺(tái)
9、上。,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),三、腹部除毛:將腹部毛刮除或剪除。,四、小腸兩端插管:沿腹部正中線(腹白線)切開腹部(約3~4 cm),在十二指腸上部(先找到胃)和回腸下部(先找到盲腸)各插入細(xì)玻璃管并用線扎緊,縫合切口(不縫合,上覆以浸有生理鹽水的紗布)。,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),五、洗滌腸管:用37 ℃緩沖液(或生理鹽水),緩緩注入腸管,洗去腸管內(nèi)容物。充分洗凈后送入空氣使洗滌液盡量流盡。注意:1、先將腸管捋順,
10、卻保無死結(jié); 2、推注時(shí)不要太快,以免漲破腸管; 3、充分洗凈后送入空氣使洗滌液盡量流盡。,六、作成回路:吸取供試液50 mL,從十二指腸上部進(jìn)入腸管并流入貯液瓶中,按圖所示作成回路。開動(dòng)蠕動(dòng)泵記錄開始回流時(shí)間。,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),七、取樣:回流開始后10 min,取樣二份,一份1 mL,另一份0.5 mL,分別作為藥物和酚紅的零時(shí)間樣品。其后每隔10 min亦同樣取樣二份。
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