應用液相蛋白芯片技術篩選治療老年性癡呆方藥初探.pdf

1、應用液相蛋白芯片技術篩選治療老年性癡呆方藥初探研究背景老年性癡呆即阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是目前公認的危害人類健康的主要疾病之一，己成為威脅中國老年人健康的、僅位于心臟病、腫瘤、卒中之后的第四大疾病。由于AD病理變化的復雜性，盡管世界各國在尋找AD有效治療藥物的研究中投入了大量的人力和物力，但成果卻十分有限。作為天然藥物的中藥尤其是復方，在防治老年性疾病方面則有著豐富的理論和實踐經驗以及潛在的優(yōu)勢，因

2、此，闡明中藥復方防治AD的藥理機制，篩選和研制能延緩AD進程、提高患者生活質量的中藥新藥將具有重要的現(xiàn)實意義和廣闊的應用前景。 目的：本實驗研究擬采用國內剛引進的液相蛋白芯片(Luminex)技術，研究不同治則中藥復方對癡呆動物模型體內細胞因子的影響，同時結合藥物治療后癡呆動物模型學習記憶能力的變化，尋找AD生物標志物和篩選治療AD的有效方藥，為建立AD液相蛋白芯片技術平臺作前期準備，為篩選新型防治老年性癡呆中藥復方探索新的途徑

3、和手段，同時嘗試篩選出治療癡呆動物模型的1-2種有效方藥。 方法：快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse，SAM)購白天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院老年腦病研究室動物中心，7月齡快速老化亞系SAM-prone/8(SAMP8)小鼠按區(qū)組隨機法分為癡呆模型組、腦復康組、六味地黃湯組、四君子湯組、歸脾湯組、當歸芍藥散組，每組14只。15只抗快速老化亞系SAM-resistant/1(SAMR1)作為正

4、常對照組。給藥4周后，進行為期6天的Morris水迷宮測試；水迷宮測試完成后，斷頭取出其雙側海馬和皮質作為樣本；用液相蛋白芯片(Luminex)技術同時測定腦組織的lO種細胞因子(GM-CSF、IFNγ、TNFα、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12)含量。數(shù)據(jù)結果以x±s表示，用SPSS11.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結果： 1．Morris水迷宮定位航行試驗結果表明，與正常

5、對照組相比，SAM癡呆小鼠模型組的逃避潛伏期時間明顯增加(P<0.05)，游泳速度則明顯下降(P<0.05)；與模型組相比，四君子湯組、六味地黃湯組、歸脾湯組的逃避潛伏期時間均明顯減少(P<0.05，P<0.01)，四君子湯組的游泳路程明顯縮短(P<0.05)。 2．在本次實驗檢測的SAMP8小鼠皮質勻漿液10種細胞因子指標中，與正常對照組比較，除了IL-6和IL-10有下降趨勢外，其余8種細胞因子含量均呈升高趨勢，但只有GM-

6、CSF的含量明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與正常對照組比較，SAMP8小鼠海馬勻漿液中所有10種細胞因子含量均呈下降趨勢，除了TNFα和IL-5外，其余8種細胞因子含量均明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。 3．六味地黃湯組、當歸芍藥散組和腦復康組的GM-CSF含量均與正常對照組水平接近(P>0.05)，而四君子湯組和歸脾湯組則和模型組一樣，明顯高于正常對照組(P<0.05

7、)。說明前3種藥物能在一定程度上抑制SAMP8小鼠皮質GM-CSF含量的升高。從不同藥物組對SAMP8小鼠海馬勻漿液10種細胞因子的影響結果發(fā)現(xiàn)，陽性對照藥腦復康能分別提高模型小鼠海馬中的IFNγ、IL-4和IL-12的水平(P<0.05，P<0.01)；當歸芍藥散能分別提高模型小鼠海馬中的IFNγ),和IL-4的水平(P<0.05)；四君子湯組也能提高模型小鼠海馬中的IFNγ水平(P<0.05)；而六味地黃湯組則能使模型小鼠海馬中的G

8、M-CSF、IFNγ),、INFα、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12等10種細胞因子指標全部顯著升高(P<0.05，P<0.01)，大多恢復到正常水平。 結論： 1．通過Morris水迷宮行為學測試，與同月齡正常小鼠SAMRl相比，9月齡SAMP8小鼠的學習記憶能力明顯下降，是理想的癡呆動物模型；六味地黃湯、四君子湯、歸脾湯對SAMP8小鼠的學習記憶能力都有明顯的改善作用。

9、 2．9月齡SAMP8小鼠腦組織中某些細胞因子表達發(fā)生異常改變，皮質中的GM-CSF的含量明顯升高，海馬中的8種細胞因子含量均明顯降低；SAM癡呆小鼠腦組織(尤其是海馬)中的細胞因子表達的改變可能與衰老相關的神經功能紊亂或認知功能缺陷有關。 3．六味地黃湯、當歸芍藥散、四君子湯則能在一定程度上調節(jié)SAMP8小鼠的異常免疫反應，其中六味地黃湯的作用效果最好。各用藥組對SAM癡呆小鼠異常免疫狀態(tài)的調節(jié)作用與改善其認知功能障礙可能有