玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、滅菌實(shí)驗(yàn)

1、玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、滅菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、進(jìn)一步加強(qiáng)學(xué)習(xí)、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技術(shù)。2、為下一次的課做好器材的準(zhǔn)備工作。二、原理為確保實(shí)驗(yàn)順利地進(jìn)行，要求把實(shí)驗(yàn)所用的玻璃器皿清洗干凈。為保持滅菌后和無菌狀態(tài)，需要對培養(yǎng)皿、吸管等進(jìn)行包扎，對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單，但如操作不當(dāng)或不安操作規(guī)定去做，則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至?xí)?dǎo)致試驗(yàn)的失敗。滅菌原理：高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一

2、個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在1213℃滅菌20分鐘即可。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本

3、身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160—170℃），時間長（1—2小時）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱滅菌。三、試劑和儀器（一）儀器高壓蒸汽滅菌鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報(bào)紙、硅膠塞等四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）玻璃器皿

4、的清洗：l新購的玻璃器皿的洗滌將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，以除去游離的堿性物質(zhì)，最后用流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉(zhuǎn)動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。l常用舊玻璃器皿的洗滌確實(shí)無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進(jìn)行刷洗；吸取過化學(xué)試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。l帶菌玻璃器皿的洗滌

5、凡實(shí)驗(yàn)室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，必須經(jīng)過高溫滅菌或消毒后才能進(jìn)行刷洗：1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品，做完實(shí)驗(yàn)后放入消毒桶內(nèi)，用0.1MPa滅菌20～30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的滅菌，底蓋要分開放入不同的桶中，再進(jìn)行高壓滅菌。2、帶菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，再經(jīng)0.1MPa滅菌20min后，取出沖洗。3、帶菌

6、載玻片及蓋玻片，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，用夾子取出經(jīng)清水沖干凈。易造成漏氣，達(dá)不到徹底滅菌的目的。3、通電加溫，打開排氣活門，排盡鍋內(nèi)的空氣。通常當(dāng)壓力表指針升至5磅或0.05MPa時，打開排氣活門放氣，待壓力表指針降至零點(diǎn)一小段時間后，再關(guān)閉活門。即活門沖出的全部是蒸汽時則表示徹底，此時可關(guān)閉排氣活門，如果過早關(guān)閉活門，排氣不徹底，也達(dá)不到徹

7、底滅菌的目的。4、恒溫滅菌:0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘。壓力表的指針上升時，鍋內(nèi)溫度也逐漸升高，當(dāng)壓力表指針升至0.1MPa時或15磅時，鍋內(nèi)溫度相當(dāng)于120℃～121℃（等于一個大氣壓），此時開始計(jì)算滅菌時間，控制熱源，使處于0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘，即能達(dá)到完全滅菌的目的，然后停止加溫。當(dāng)達(dá)到所需溫度時開始計(jì)時，并在此溫度下保持所需的時間。5、降溫：自然降溫或打開活門排汽降溫。稍微打開一點(diǎn)排氣活門，

8、使鍋內(nèi)蒸汽緩慢排除，然后逐漸開大活門，氣壓徐徐下降，注意勿使排氣過快，否則會使鍋內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾染棉花塞，但排氣太慢又使培養(yǎng)基在鍋內(nèi)，受高溫處理時間過長，對培養(yǎng)基也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。6、當(dāng)鍋內(nèi)蒸汽完全排盡時即壓力表指針降到零時，要立即打開鍋蓋。7、取出滅菌物品：當(dāng)鍋內(nèi)溫度下降到60℃左右時器材或培養(yǎng)基。如培養(yǎng)基需制備固體斜面培養(yǎng)基時，則應(yīng)趁熱將試管斜放在桌上，上面蓋上報(bào)紙以免落灰塵，冷卻后便可收起