動物源性成分

1、飼料中動物源性成分檢測技術(shù)研究進展摘要:飼料安全與動物生產(chǎn)、環(huán)境污染和人類健康密切相關(guān)。動物廢棄物進入飼料行業(yè)曾經(jīng)彌補了蛋白質(zhì)飼料不足的缺口但卻帶來了新的問題。飼料中動物源性成分的定性或定量檢測技術(shù)已成為國內(nèi)外的研究熱點，適用于各種樣品、基于各種原理的方法和技術(shù)被開發(fā)出來。本文以組織學(xué)特征為基礎(chǔ)的顯微鏡分析方法、以蛋白質(zhì)和DNA為基礎(chǔ)的免疫學(xué)和PCR分析方法、高效液相色譜法和近紅外光譜法在動物源性飼料組分中的研究應(yīng)用進展等方面做了綜述并

2、對其發(fā)展趨勢進行討論。飼料安全已與動物生產(chǎn)、環(huán)境污染和人類健康密切相關(guān)。動物源性副產(chǎn)品因富含蛋白質(zhì)、鈣、磷等營養(yǎng)成分而被應(yīng)用于畜禽飼料中但現(xiàn)有的證據(jù)表明在動物飼料中添加未經(jīng)加熱處理牛源性飼料或感染過癢病因子的牛(羊)肉肉骨粉(MBM)后能夠引發(fā)和傳播瘋牛病(BSE)。我國于1999、2001和2004年先后下發(fā)了關(guān)于對動物源性飼料生產(chǎn)和管理的相關(guān)條例主要對反芻動物源性飼料組分、MBM、肉粉、骨粉、血粉、動物內(nèi)臟干粉和動物廢棄物等使用做了

3、嚴(yán)格的規(guī)定。目前關(guān)于飼料中動物源性成分檢測主要以樣品的組織學(xué)特性和品種特異性的生物標(biāo)記物(如蛋白質(zhì)、DNA和其他生物大分子等)為對象其中PCR技術(shù)發(fā)展迅速已逐步被世界各國采用。但由于動物源性飼料組成上的復(fù)雜性單一的PCR技術(shù)仍不能克服耗時、效率低和假陽性等問題。因此研究并建立一種(套)快速、靈敏、可靠的動物源性飼料檢測技術(shù)對于提高飼料質(zhì)量、防止飼料摻假、控制進口飼料安全和制訂相關(guān)飼料法規(guī)等均具有重要意義。本文中動物源性成分是指動物組織以

4、及蛋和奶，包括肉類及其制品(含動物臟器)、水生動物產(chǎn)品等，檢測技術(shù)是指上述成分中蛋白質(zhì)和DNA等具有種間特異性物質(zhì)的物種鑒定和含量分析技術(shù)。該技術(shù)已成為保護消費者權(quán)益和安全的重要技術(shù)手段。動物源性成分檢測技術(shù)通常建立在對樣品蛋白質(zhì)、DNA、脂肪酸等分子結(jié)構(gòu)、序列或組成特異性分析的基礎(chǔ)上。涉及的技術(shù)手段包括酶聯(lián)免疫、聚合酶鏈?zhǔn)角蓊愡€是魚類肌肉組織一般都被破壞成短的纖維其寬度依據(jù)處理的方法和動物的營養(yǎng)狀況而不同。動物肌纖維一般沒有各自的明顯

5、特征肌纖維的出現(xiàn)與否是判定飼料中是否出現(xiàn)動物源性成分的重要依據(jù)。飼料中毛發(fā)、羽毛、蛋殼、魚刺、魚鰓的檢出可以進一步確定飼料中是否出現(xiàn)動物源性成分。歐盟已嘗試通過飼料顯微鏡學(xué)方法來進行定量測定。飼料顯微鏡學(xué)方法具有樣品制備量少、設(shè)備便宜、簡單易行的優(yōu)點但該方法費時、費力對技術(shù)人員的要求高結(jié)果與試驗員的經(jīng)驗相關(guān)性很大。不同樣品中所含有動物源性成分的來源多樣低倍鏡下顏色的重疊比較大高倍鏡下骨陷窩的重疊性比較大。這要求顯微鏡分析師達到較高的專業(yè)

6、水平。因此迫切需要建立一套新的、合適的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。1基于蛋白特異性的檢測技術(shù)1.1蛋白分子立體結(jié)構(gòu)特異性基于蛋白的鑒別技術(shù)大多以蛋白分子立體結(jié)構(gòu)特異性為基礎(chǔ)，應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合的原理建立，通過檢測標(biāo)記信號的有無或強弱來判斷目標(biāo)成分的有無或多少。該類技術(shù)具有操作簡單、特異性好、不需要大型儀器設(shè)備的優(yōu)點，容易操作，可以進行大規(guī)模檢測，其核心技術(shù)是特異性抗原和抗體的篩選與制備。骨骼肌中的肌鈣蛋白I(troponinI，tnI)具有高特異性和

7、熱穩(wěn)定性，是理想的抗原之一，Liu等[1]（LIULihuaCHENFurchiDSEYJLetal.SensitivemonoclonalantibodybasedswichELISAfthedetectionofpcineskeletalmuscleinmeatfeedproducts[J].FoodScience200671(1):M1M6.）以豬tnI為抗原制備了兩種單克隆抗體Mab8F10和Mab5H9，Mab8F10能夠和所

8、有的哺乳動物tnI而Mab8F10只和豬tnI特異性反應(yīng)，用該組抗體開發(fā)的抗體夾心法能夠檢出雞肉和牛肉中摻雜的豬肉成分(檢出限分別為0.05%和0.1%)、檢出大豆蛋白基料飼料中和肉骨粉中的肉成分(檢出限分別為0.05%和1%)，而且樣品經(jīng)過132℃、2h的高溫處理后不影響檢測效果。基于蛋白分子立體結(jié)構(gòu)特異性的檢測方法也有局限性，蛋白抗原決定簇的立體結(jié)構(gòu)會受到多種環(huán)境因素影響而改變，當(dāng)檢測加工過的成分時其特異性和準(zhǔn)確性會大打折扣，此時需