肉制品中驢源性成分pcr方法的建立及其應(yīng)用

1、收稿日期：基金項(xiàng)目：河北出入境檢驗(yàn)檢疫局自主立項(xiàng)項(xiàng)目（HE2011K019）作者簡(jiǎn)介：郭鳳柳（1986），女，河北辛集人，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物檢驗(yàn)。Tel:03123110331Email:guofengliu160@。通信作者：劉曉慧（1980），女，Tel:03123110331Email:drlxh@肉制品中驢源性成分肉制品中驢源性成分PCR方法的建立及其應(yīng)用方法的建立及其應(yīng)用摘要：摘要：本研究建立了對(duì)驢源性成分快速分子檢測(cè)

2、方法，確立了一對(duì)驢源性成分的特異性引物HseFHseR，擴(kuò)增目的片段的長(zhǎng)度是294bp，經(jīng)驗(yàn)證引物對(duì)驢源性成分的特異性良好，確立了PCR反應(yīng)的最佳反應(yīng)體系和最優(yōu)反應(yīng)條件。反應(yīng)體系的檢測(cè)靈敏度是13.7pgμL。擴(kuò)增片段經(jīng)AluⅠ酶切分析確認(rèn)，所得181bp和113bp片段與分析結(jié)果一致。利用本法對(duì)抽取的樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：驢源性成分；檢測(cè)方法；PCR反應(yīng)中圖分類號(hào)：S822文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：AEstablishment

3、applicationofPCRmethodtothedonkeyderivedingredientsinmeatproducts隨著現(xiàn)在人們生活水平的提高，對(duì)肉的要求也越來(lái)越高，而目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上在肉和肉制品的生產(chǎn)與銷售中，利用摻雜摻假、以次充好等手段欺騙消費(fèi)者，謀取暴利的事件屢屢出現(xiàn)。我國(guó)食品工業(yè)飛速發(fā)展，食品的摻假方式越來(lái)越多、范圍越來(lái)越廣、內(nèi)容越來(lái)越復(fù)雜。一些不法商家或個(gè)人為了追求自身利益而以低價(jià)劣質(zhì)的肉冒充高價(jià)優(yōu)質(zhì)的肉[1]，如

4、用雞肉冒充豬肉，豬肉、鴨肉冒充牛羊肉等造假行為最為常見(jiàn)。這不僅僅涉及經(jīng)濟(jì)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食品安全等問(wèn)題，更直接影響著消費(fèi)者的健康。此外，例如在清真食品中摻雜進(jìn)豬肉等還涉及到宗教信仰等問(wèn)題。因此，對(duì)食品中原料肉進(jìn)行摻假、摻雜檢驗(yàn)顯得十分必要，其重點(diǎn)就是在快速、準(zhǔn)確的鑒定肉制品品種。保定驢肉火燒是著名小吃，和保定三寶并駕齊驅(qū)。驢肉中必需氨基酸含量非常豐富，并且富含人體所必需的脂肪酸，是一種高蛋白，低脂肪的營(yíng)養(yǎng)食物，此外，驢肉中礦物元素鐵含量高于

5、其他畜禽肉，其食用價(jià)值高、營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，值得大力開(kāi)發(fā)研究和推廣[2]。也是由于上述原因，驢肉在人們?nèi)粘Ｉ钪械男枨罅吭絹?lái)越大，價(jià)格越來(lái)越高。致使摻假問(wèn)題也越來(lái)越普遍，因此肉種類的鑒定在食品分析方面是一個(gè)重要的問(wèn)題。PCR技術(shù)已經(jīng)是食品中肉類成分鑒別的主流技術(shù)，研究的對(duì)象主要集中在市場(chǎng)上常見(jiàn)的羊肉、牛肉、豬肉、雞肉上，但是還沒(méi)有關(guān)于驢源性成分PCR檢測(cè)方法的報(bào)道。本研究合成了一對(duì)用于檢測(cè)驢源性成分的特異性引物，通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系的摸索及

6、反應(yīng)條件的優(yōu)化，驗(yàn)證了方法的特異性與靈敏度，建立了鑒定驢源性成分的PCR技術(shù)，為杜絕貿(mào)易中的欺騙行為提供了快捷可靠的檢測(cè)方法。1材料與方法1.1主要試劑與儀器蛋白酶K、RNA酶、dNTPs、10PCR緩沖液、MgCl2、TaqDNA聚合酶、2000bpladderDNAmarker、血液細(xì)胞組織基因組DNA提取試劑盒、DNA瓊脂糖凝膠回收試劑盒等均購(gòu)圖1驢源性成分PCR擴(kuò)增結(jié)果1.空白對(duì)照；2.陰性對(duì)照；3.熟驢肉的擴(kuò)增結(jié)果；4.Mar

7、ker2000測(cè)序結(jié)果：TGCCACAGTTGGATACATCAACATGATTTATTAATATCGTCTCAATAATCCTAACTCTATTTATTGTATTCCAACTAAAAATTTCAAAGCACTCTTATCCAATACACCCAGAAGCTAAAACAACTAAAATAGCTAAACGCCTTACCCCTTGAGAATCAAAATGAACGAAAATCTATTCGCCTCTTTCGCTACCCCAACAATAATAGGC