肉制品中驢源性成分pcr方法的建立及其應用

1、收稿日期：基金項目：河北出入境檢驗檢疫局自主立項項目（HE2011K019）作者簡介：郭鳳柳（1986），女，河北辛集人，碩士研究生，研究方向為動物檢驗。Tel:03123110331Email:guofengliu160@。通信作者：劉曉慧（1980），女，Tel:03123110331Email:drlxh@肉制品中驢源性成分肉制品中驢源性成分PCR方法的建立及其應用方法的建立及其應用摘要：摘要：本研究建立了對驢源性成分快速分子檢測

2、方法，確立了一對驢源性成分的特異性引物HseFHseR，擴增目的片段的長度是294bp，經驗證引物對驢源性成分的特異性良好，確立了PCR反應的最佳反應體系和最優(yōu)反應條件。反應體系的檢測靈敏度是13.7pgμL。擴增片段經AluⅠ酶切分析確認，所得181bp和113bp片段與分析結果一致。利用本法對抽取的樣品進行檢測，檢測結果準確。關鍵詞：關鍵詞：驢源性成分；檢測方法；PCR反應中圖分類號：S822文獻標識碼：AEstablishment

3、applicationofPCRmethodtothedonkeyderivedingredientsinmeatproducts隨著現在人們生活水平的提高，對肉的要求也越來越高，而目前國內市場上在肉和肉制品的生產與銷售中，利用摻雜摻假、以次充好等手段欺騙消費者，謀取暴利的事件屢屢出現。我國食品工業(yè)飛速發(fā)展，食品的摻假方式越來越多、范圍越來越廣、內容越來越復雜。一些不法商家或個人為了追求自身利益而以低價劣質的肉冒充高價優(yōu)質的肉[1]，如

4、用雞肉冒充豬肉，豬肉、鴨肉冒充牛羊肉等造假行為最為常見。這不僅僅涉及經濟、營養(yǎng)價值和食品安全等問題，更直接影響著消費者的健康。此外，例如在清真食品中摻雜進豬肉等還涉及到宗教信仰等問題。因此，對食品中原料肉進行摻假、摻雜檢驗顯得十分必要，其重點就是在快速、準確的鑒定肉制品品種。保定驢肉火燒是著名小吃，和保定三寶并駕齊驅。驢肉中必需氨基酸含量非常豐富，并且富含人體所必需的脂肪酸，是一種高蛋白，低脂肪的營養(yǎng)食物，此外，驢肉中礦物元素鐵含量高于

5、其他畜禽肉，其食用價值高、營養(yǎng)豐富、味道鮮美，值得大力開發(fā)研究和推廣[2]。也是由于上述原因，驢肉在人們日常生活中的需求量越來越大，價格越來越高。致使摻假問題也越來越普遍，因此肉種類的鑒定在食品分析方面是一個重要的問題。PCR技術已經是食品中肉類成分鑒別的主流技術，研究的對象主要集中在市場上常見的羊肉、牛肉、豬肉、雞肉上，但是還沒有關于驢源性成分PCR檢測方法的報道。本研究合成了一對用于檢測驢源性成分的特異性引物，通過對反應體系的摸索及

6、反應條件的優(yōu)化，驗證了方法的特異性與靈敏度，建立了鑒定驢源性成分的PCR技術，為杜絕貿易中的欺騙行為提供了快捷可靠的檢測方法。1材料與方法1.1主要試劑與儀器蛋白酶K、RNA酶、dNTPs、10PCR緩沖液、MgCl2、TaqDNA聚合酶、2000bpladderDNAmarker、血液細胞組織基因組DNA提取試劑盒、DNA瓊脂糖凝膠回收試劑盒等均購圖1驢源性成分PCR擴增結果1.空白對照；2.陰性對照；3.熟驢肉的擴增結果；4.Mar

7、ker2000測序結果：TGCCACAGTTGGATACATCAACATGATTTATTAATATCGTCTCAATAATCCTAACTCTATTTATTGTATTCCAACTAAAAATTTCAAAGCACTCTTATCCAATACACCCAGAAGCTAAAACAACTAAAATAGCTAAACGCCTTACCCCTTGAGAATCAAAATGAACGAAAATCTATTCGCCTCTTTCGCTACCCCAACAATAATAGGC