瘤胃微生物Real Time PCR定量方法的建立及其應(yīng)用.pdf

1、本研究分別以產(chǎn)甲烷菌、原蟲(chóng)和瘤胃細(xì)菌為例，根據(jù)其16S/18SrDNA序列、ITS序列和特有蛋白的基因序列，利用RealTimePCR技術(shù)，分別在種和類的水平上，建立了對(duì)瘤胃微生物絕對(duì)定量與相對(duì)定量的分子生物學(xué)方法，為瘤胃微生物的研究提供了一種快速、準(zhǔn)確的方法。同時(shí)，應(yīng)用此方法研究了植物油對(duì)瘤胃中產(chǎn)甲烷菌數(shù)量、氫化細(xì)菌數(shù)量及原蟲(chóng)數(shù)量的影響，探討了植物油降低瘤胃微生物甲烷產(chǎn)量的途徑?！　±肁ccⅠ、EcoRⅠ，PstⅠ、PvuⅡ、Sa

2、cⅠ、SmaⅠ等6種限制性內(nèi)切酶將基因組酶切，通過(guò)Southern雜交確定M.formicicum的16SrDNA序列在基因組中有2個(gè)拷貝?！　∫訧TS為靶序列，采用SYBRGreenⅠ熒光染料RealTimePCR法成功對(duì)M.mazei進(jìn)行了定量檢測(cè)，有效檢測(cè)靈敏度可達(dá)300拷貝/25μL體系。同時(shí)，以微生物合成甲烷過(guò)程中的關(guān)鍵酶mcrA基因?yàn)榘谢?，采用SYBRGreenⅠ熒光染料RealTimePCR法，建立了瘤胃總產(chǎn)甲烷菌相對(duì)