速凍水餃中微生物變化規(guī)律及多重PCR檢測(cè)技術(shù)的建立.pdf

1、本文以速凍水餃為研究對(duì)象，研究了不同檢驗(yàn)條件對(duì)水餃菌落總數(shù)的影響，貯藏期內(nèi)速凍水餃品質(zhì)變化及優(yōu)勢(shì)菌的組成，反復(fù)凍融對(duì)速凍水餃的微生物及理化品質(zhì)的影響，并建立了一種能同時(shí)檢測(cè)速凍食品中沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的高效多重PCR技術(shù)。主要結(jié)論如下：
　　 研究了不同檢驗(yàn)條件對(duì)速凍水餃菌落總數(shù)的影響，對(duì)于速凍食品，按照樣品的解凍要求，待樣品解凍完全時(shí)再實(shí)施檢驗(yàn)，更能客觀的反映出實(shí)際的污染程度；平板傾注法、平板涂布法、6×6平板計(jì)數(shù)法三種

2、方法相比，平板涂布法最適合檢測(cè)速凍低溫食品的菌落總數(shù)；在檢測(cè)一批較多樣品時(shí)，檢樣稀釋至涂布時(shí)間的間隔不宜超過(guò)20min。
　　 對(duì)貯藏期內(nèi)速凍水餃品質(zhì)變化及優(yōu)勢(shì)菌的組成進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，貯藏期內(nèi)水餃肉餡的細(xì)菌總數(shù)整體上略有上升，pH值變化不明顯，硬度、彈性、凝聚性、咀嚼性均略有下降；利用傳統(tǒng)分離培養(yǎng)的方法對(duì)速凍水餃肉餡中的細(xì)菌進(jìn)行分離，得到17株細(xì)菌，采用16S rDNA分子生物學(xué)方法對(duì)17株細(xì)菌進(jìn)行分類鑒定，最終

3、確定速凍水餃肉餡中存在4個(gè)屬，6種細(xì)菌：馬腸鏈球菌(Streptococcus equinus)，牛鏈球菌(Streptococcus bovis)，豬鏈球菌(Streptococcus suis)，假單胞菌屬(Pseudomonas argentinensis)，陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)，成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)。
　　 模擬了冷藏鏈中溫度的波動(dòng)，觀察反復(fù)凍融對(duì)速凍水餃品

4、質(zhì)的影響，發(fā)現(xiàn)溫度的波動(dòng)會(huì)加快水餃酸價(jià)、過(guò)氧化值超標(biāo)的進(jìn)度；隨凍融次數(shù)的增加，實(shí)驗(yàn)組水餃肉餡的酸價(jià)、過(guò)氧化值、硫代巴比妥酸值均逐漸增加，細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群數(shù)略有增加，霉菌及酵母菌數(shù)變化不明顯。
　　 本研究?jī)?yōu)化多重PCR反應(yīng)的最佳退火溫度為60℃，最佳引物濃度為200nM，最佳循環(huán)次數(shù)為35次；基因組DNA提取方法中試劑盒法在多重PCR檢測(cè)大批樣本時(shí)更加靈敏、準(zhǔn)確，而水煮法其檢測(cè)靈敏度比試劑盒法較低，但應(yīng)用于多重PCR檢測(cè)時(shí)更能

5、節(jié)約時(shí)間、成本，在提取DNA和多重PCR檢測(cè)前，通過(guò)富集培養(yǎng)細(xì)菌，以彌補(bǔ)水煮法靈敏度較低的缺點(diǎn)。
　　 檢測(cè)多重PCR擴(kuò)增靈敏度時(shí)，試劑盒法提取的基因組DNA，沙門氏菌和金黃色葡萄球菌檢出限分別是31和26 copies/reaction通過(guò)對(duì)2種食源性致病菌多重PCR體系的建立及人工污染速凍食品的檢測(cè)，該方法能同時(shí)擴(kuò)增出2種致病菌的目的基因，只需增菌4h，就能同時(shí)檢測(cè)出起始菌落數(shù)低至10CFU/10g速凍水餃的沙門氏菌和金黃色