漆酶、酪氨酸酶和辣根過氧化物酶催化酚類及苯胺化合物動力學(xué)分析及應(yīng)用.pdf

1、目的：含酚、苯胺類廢水是環(huán)境中水污染的重要來源之一，因此，對酚類和苯胺類化合物的快速檢測是環(huán)境監(jiān)測中一項十分重要的內(nèi)容。本研究利用漆酶、酪氨酸酶和辣根過氧化物酶三種氧化酶對酚類及苯胺類化合物進行動力學(xué)特性分析，建立酚類、苯胺類化合物酶促反應(yīng)的分光光度分析方法。
　　 方法：按照功能基團，擬選取13種代表性酚類和6種苯胺類化合物作為三種酶的待測底物。利用分光光度計光譜掃描進行底物篩選，確定底物吸收峰，并以分光光度法分別測定酶催化0

2、～10 mg/L和0～1mg/L兩個不同濃度范圍的酚類和苯胺類化合物的反應(yīng)速率，作出底物濃度與反應(yīng)速率的標(biāo)準(zhǔn)曲線。并利用漆酶篩查并檢測了3種焦化廢水中非揮發(fā)酚類含量。同時以雙孢菇為原料，對酪氨酸酶進行了純化分離。
　　 結(jié)果：
　　 （1）在酚類、苯胺類化合物酶促反應(yīng)的分光光度分析方法中，漆酶的底物主要以多元酚、氨基酚和多元胺為主；酪氨酸酶對底物具有較強的專一性，對鄰苯二酚、焦性沒食子酸和2-氨基酚具有較強的催化能力；辣

3、根過氧化物酶在底物的選擇性上具有廣普性，能催化氧化漆酶所不能氧化的一元胺、一元酚等化合物。利用漆酶、酪氯酸酶、辣根過氧化物酶所測定的底物濃度.反應(yīng)速率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，除（）酶測定的聯(lián)苯胺外，均得到了較好的一級反應(yīng)動力學(xué)線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2在0.96以上。除漆酶有部分檢測物線性范圍難以達到國家酚氯及苯胺類排放標(biāo)準(zhǔn)，酪氨酸酶和辣根過氧化物酶檢測線性范圍下限（）可達到國家排放標(biāo)準(zhǔn)。
　　 （2）3種廢水中鄰苯二酚含量分別為190.5、2

4、65.8和1553mg/L，回收率在91.9‰～115.8％之間。
　　 （3）雙孢菇經(jīng)勻漿、離心、鹽析、透析、DEAE-Sephan：R Fastflow層析、濃縮、Sephadex G-75層析等一系列操作步驟，獲得了活性較高，成分單一的酪氨酸酶。該酶催化L，-DOPA的最適pH為7.0，Kx值為0.182mmol/L。
　　 結(jié)論：建立了一種多酶系統(tǒng)測定酚類和苯胺類化合物（）分光光度法，方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，