尼妥珠單抗不同給藥時(shí)間對(duì)人肺腺癌a549、calu6細(xì)胞放射增

1、尼妥珠單抗不同給藥時(shí)間對(duì)人肺腺癌A549、Calu-6細(xì)胞放射增敏作用的研究,第一作者：劉曉斌指導(dǎo)教師：袁智勇天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院放療科/肺癌診治中心,研究背景,★肺癌發(fā)病率高 ，非小細(xì)胞肺癌占80%， 總5年存活率低?！锓暖煰熜圆焕硐??！锓派湓雒魟┛梢蕴岣叻暖煰熜А７肿?靶向藥物：低毒、高效，表皮生長(zhǎng)因 子受體（EGFR）成為治療肺癌靶點(diǎn)。,,,存在問題,？EGFR抑制劑聯(lián)合放療的最佳給藥時(shí)間尚不明確。

2、？ EGFR抑制劑聯(lián)合放療治療相同類型腫瘤時(shí)，療效差別較大，具體原因不明，尚缺乏預(yù)測(cè)放射增敏療效的相關(guān)指標(biāo)。,研究對(duì)象和目的,★對(duì)象◆細(xì)胞系：人肺腺癌A549、Calu-6細(xì)胞系◆主要試劑：尼妥珠單抗◆主要儀器：醫(yī)科達(dá)直線加速器★目的●明確尼妥珠單抗聯(lián)合放療的最佳給藥時(shí)間?！駜煞N細(xì)胞采用相同實(shí)驗(yàn)方案，觀察結(jié)果是否相同，并探討產(chǎn)生差異的原因。,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),放療,,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn),SER,,,,流式細(xì)胞術(shù),Western

3、 blot,細(xì)胞周期細(xì)胞凋亡,AktpAkt,BaxBCL-2,P21,,,p-DNA-PK,,放射損傷,下游通路,凋亡指標(biāo),關(guān)卡蛋白,,,,原因,MTT實(shí)驗(yàn)計(jì)算A549、Calu-6各自的IC20 /IC50值,,同時(shí)加藥,24h后加藥,,,,,,,,,,,24h前加藥,Western blot檢測(cè)A549、Calu-6EGFR表達(dá),,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,WESTERN BIOT檢測(cè)兩種細(xì)胞EGFR表達(dá),A:A549或者Calu-6細(xì)胞

4、 B:陽性對(duì)照 C:陰性對(duì)照,MTT檢測(cè)尼妥珠單抗對(duì)兩種細(xì)胞的增殖抑制作用,24hIC20,克隆形成曲線,A549,Calu-6,克隆形成結(jié)果,,,O N R,N→R

5、NR R→N,A549細(xì)胞周期圖,O N R,N→R NR

6、 R→N,N→R NR R→N,N→R NR R→N,A549細(xì)胞周期結(jié)果,*表示與相同時(shí)相其它實(shí)

7、驗(yàn)組比較P值均<0.05,,,,Calu-6細(xì)胞周期圖,O N R,N→R NR

8、R→N,Calu-6細(xì)胞周期結(jié)果,*表示與相同時(shí)相其它實(shí)驗(yàn)組比較P值均<0.05,,O N R,N→R NR

9、 R→N,A549細(xì)胞各組凋亡圖,N→R NR R→N,Calu-6細(xì)胞各組凋亡圖,O N

10、 R,N→R NR R→N,A549、 Calu-6細(xì)胞凋亡結(jié)果,*表示與相同細(xì)胞系其它實(shí)驗(yàn)組比較P值均<0.05,,WESTERN BLOT,各組Akt、pAkt灰度值,*與各個(gè)實(shí)驗(yàn)組比較，p＜0.05,,,小結(jié)㈠,◆相同的結(jié)果

11、兩種細(xì)胞N→R組的SER最高。兩種細(xì)胞N→R組的G2/M期比例和凋亡率最高 。兩種細(xì)胞N→R組的Bax、 P21達(dá)最高值，Bcl-2 、phospho-DNA-PK達(dá)最低值。各組Akt表達(dá)無差異。 pAkt表達(dá)在N→R組表達(dá)減至最低 ?！钌鲜龈淖儽砻鲀煞N不同的細(xì)胞系，尼妥珠單抗放療協(xié)同效應(yīng)最佳順序均為放療前24h給藥。,小結(jié)㈡,◆不同的結(jié)果尼妥珠單抗對(duì)A549細(xì)胞的抑制作用更強(qiáng)。尼妥珠單抗無論何時(shí)給藥均對(duì)A549細(xì)胞產(chǎn)生放射

12、增敏作用，而Calu-6細(xì)胞僅見于放療前給藥。Calu-6細(xì)胞N組的G0/G1期阻滯不明顯， NR組、R → N 組未見G2/M期比例和凋亡率升高。A549細(xì)胞EGFR表達(dá)較高，而Calu-6細(xì)胞Akt、 pAkt表達(dá)較高。,討論,⒈A549、Calu-6細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同的潛在原因：⑴ EGFR單抗的放射增敏作用與腫瘤細(xì)胞表面的EGFR表達(dá)水平密切關(guān)系。⑵Akt、 pAkt可能是抗EGFR療法中的耐藥因子。 ⒉推測(cè)Calu-6