食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)檢查操作程序

1、菌落總數(shù)檢查操作程序1實驗前準備1.1稀釋水、刻度吸管、平皿稀釋水：瓶裝PH值7.0無菌生理鹽水，塞上膠塞，按高壓蒸氣滅菌操作程序，121℃濕熱滅菌30分鐘。取0.2ml、1ml、5ml、10ml刻度吸管、平皿置于金屬容器中，140℃干熱滅菌2小時。1.1.1培養(yǎng)基準備：平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基以上實驗所需干粉培養(yǎng)基均由中檢所提供，分別按說明加適量水加熱溶解后，塞上膠塞，濕熱滅菌30分鐘備用。1.1.2無菌衣將無菌衣、頭罩、口罩、乳膠手套疊好

2、，置于無菌衣袋中，濕熱滅菌30分鐘。1.2無菌室及操作臺的準備用0.1%的新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液將操作臺，天花板，墻壁，地面擦洗一遍，同時將操作臺用0.1%新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液擦洗一遍。將實驗所需物品通過傳遞窗移入無菌室，打開空氣凈化系統(tǒng)，打開紫外燈，殺菌0.51個小時。2實驗操作2.1進入無菌室更衣間，用0.1%新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液消毒手及腕部至少一分鐘，戴上頭罩、口罩，穿好無菌衣及無菌手套后，進入無菌室，開始實

3、驗操作。菌落總數(shù)操作程序選擇23個適宜稀釋度的樣品勻液，各取1ml分別放入無菌皿內(nèi)2.2.3用1ml無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1ml，沿管壁緩慢注于盛有9ml稀釋液的無菌試管中，振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。2.2.4按以上操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1ml無菌吸管或吸頭。2.2.5根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇23個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣

4、品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，吸取1ml樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1ml空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。2.2.6及時交1520ml冷卻至46的平析計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。2.2.7待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃1℃培養(yǎng)482小時。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基，凝固后翻轉(zhuǎn)平板培養(yǎng)。2.3菌落計數(shù)2.3.1

5、做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察。必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。2.4菌落計數(shù)的報告2.4.1平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)；其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而