生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)參考答案

1、《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Ⅰ》總復(fù)習(xí)思考題《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Ⅰ》總復(fù)習(xí)思考題部分是自己做的，部分是百度的，各位看官如果要借鑒請(qǐng)酌情考慮，后果自負(fù)。——江湖游子1.請(qǐng)掌握下列生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器的正確操作使用方法，并能回答以下問(wèn)題：（1）離心機(jī)使用時(shí)為什么要平衡？普通離心機(jī)與高速離心機(jī)在平衡時(shí)有什么不同要求？平衡是為了讓轉(zhuǎn)動(dòng)物體重心正好在轉(zhuǎn)軸上，如果不在，會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)軸產(chǎn)生很大作用力，有時(shí)整臺(tái)機(jī)器會(huì)跟著晃動(dòng)。這對(duì)機(jī)器損耗很大。轉(zhuǎn)速越高的離心機(jī)不光重量很重，使用

2、時(shí)還要特別放平衡，就連離心管里面的試液都要放置等量，離心管還要對(duì)稱(chēng)放入轉(zhuǎn)子試管孔內(nèi)，以確保轉(zhuǎn)子平衡運(yùn)行，而且在調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速時(shí)，還要使用分段升速法。(2)為什么用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行動(dòng)、植物組織搗碎時(shí)，需采用間歇式方式進(jìn)行操作？為了防止產(chǎn)熱過(guò)高，破壞組織內(nèi)的蛋白質(zhì)。防止蛋白變性。(3)用真空泵進(jìn)行減壓抽濾時(shí)，為什么要連接緩沖瓶？防止負(fù)壓產(chǎn)生，引起水泵里的水或油泵里的油倒吸，進(jìn)入濾瓶中，污染濾液。2.為什么肝糖元只能從剛宰殺的動(dòng)物肝臟中獲??？在提

3、取肝糖元過(guò)程中，三氯乙酸、95%乙醇各起什么作用？糖元水解產(chǎn)物中如果存在提取中殘留蛋白質(zhì)時(shí)，在用班氏試劑檢測(cè)水解產(chǎn)物，有什么影響！動(dòng)物死亡后，體內(nèi)的細(xì)胞還能存活一段時(shí)間，由于進(jìn)行細(xì)胞呼吸作用，肝細(xì)胞會(huì)消耗肝糖元，所以必須用新鮮的肝臟細(xì)胞。三氯乙酸是固定作用（蛋白質(zhì)能被三氯乙酸沉淀）；乙醇：糖元不溶于乙醇，可以提取糖元。班氏試劑使用時(shí)需要加熱，而加熱會(huì)時(shí)殘留的蛋白質(zhì)變性水解，對(duì)最終測(cè)得的水解產(chǎn)物顏色可能有影響。（水解的產(chǎn)生的氨氣結(jié)合銅離子

4、，是銅離子的氧化性失去，導(dǎo)致生產(chǎn)絳藍(lán)色沉淀，實(shí)驗(yàn)將失敗）3.請(qǐng)闡述分光光度儀的主要部件及其功能；闡述紫外與可見(jiàn)光的光波長(zhǎng)范圍；在紫外與可見(jiàn)光范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)吸光度時(shí)，對(duì)光源與吸收池有何要求？光電管的功能是什么？為什么說(shuō)光電管是分光光度儀最脆弱和最易損的部件？光源（鎢燈）：發(fā)光。單色器：把混合光波分解為單一波長(zhǎng)光的裝置。吸收池：盛放待測(cè)流體（液體、氣體）試樣的容器。該容器應(yīng)具有兩面互相平行、透光且有精確厚度的平面。它藉助機(jī)械操作能把待測(cè)試樣

5、間斷或連續(xù)地送到光路中，以便吸收測(cè)量的輻射（光）通量。檢測(cè)器：將單色器分出的光信號(hào)進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換，電信號(hào)在工作站顯示成出峰。測(cè)量裝置：通過(guò)測(cè)得的電流表記錄器數(shù)字示值讀書(shū)單元的數(shù)據(jù)來(lái)繪制吸收曲線。紫外光：200至350nm可見(jiàn)光波長(zhǎng):350至760nm紫外測(cè)定：其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光做光源，在低于350nm的紫外光區(qū)工作時(shí)，必須采用石英池或熔凝石英池?？梢?jiàn)光測(cè)定：用波長(zhǎng)為400～850nm的可見(jiàn)光作光源，可以用玻璃池石英

6、池熔凝池。光電管的功能：光電轉(zhuǎn)換，將光信號(hào)轉(zhuǎn)化成電信號(hào)。光電管容易產(chǎn)生光電管疲勞：所以不測(cè)定時(shí)必須將試樣室蓋蓋好，使光路切斷，以延長(zhǎng)光電管的使用壽保持垂直，刻度線和視線保持水平(左手不能接觸移液管)。稍稍松開(kāi)食指(可微微轉(zhuǎn)動(dòng)移液管或吸量管)，使管內(nèi)溶液慢慢從下口流出，液面將至刻度線時(shí)，按緊右手食指，停頓片刻，再按上法將溶液的彎月面底線放至與標(biāo)線上緣相切為止，立即用食指壓緊管口。將尖口處緊靠燒杯內(nèi)壁，向燒杯口移動(dòng)少許，去掉尖口處的液滴。將

7、移液管或吸量管小心移至承接溶液的容器中。4、放出溶液：將移液管或吸量管直立，接受器傾斜，管下端緊靠接受器內(nèi)壁，放開(kāi)食指，讓溶液沿接受器內(nèi)壁流下，管內(nèi)溶液流完后，保持放液狀態(tài)停留15s，將移液管或吸量管尖端在接受器靠點(diǎn)處靠壁前后小距離滑動(dòng)幾下(或?qū)⒁埔汗芗舛丝拷邮芷鲀?nèi)壁旋轉(zhuǎn)一周)，移走移液管(殘留在管尖內(nèi)壁處的少量溶液，不可用外力強(qiáng)使其流出，因校準(zhǔn)移液管或吸量管時(shí)，已考慮了尖端內(nèi)壁處保留溶液的體積。除在管身上標(biāo)有“吹”字的，可用吸耳球吹出

8、，不允許保留)。5.洗凈移液管，放置在移液管架上。注意事項(xiàng)：1.移液管(吸量管)不應(yīng)在烘箱中烘干。2.移液管(吸量管)不能移取太熱或太冷的溶液。3.同一實(shí)驗(yàn)中應(yīng)盡可能使用同一支移液管。4.移液管提出液面后，應(yīng)用濾紙將沾在移液管外壁的液體擦掉5.看刻度時(shí)，應(yīng)將移液管的刻度與眼睛平行，以最下面的彎月面為準(zhǔn)。6.移液管在使用完畢后，應(yīng)立即用自來(lái)水及蒸餾水沖洗干凈，置于移液管架上。7.移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作兩者的相對(duì)體積校準(zhǔn)

9、。8.在使用吸量管時(shí)，為了減少測(cè)量誤差，每次都應(yīng)從最上面刻度(0刻度)處為起始點(diǎn)，往下放出所需體積的溶液，而不是需要多少體積就吸取多少體積。比色皿加樣：手持干凈的比色皿粗糙面，將裝有溶液的試劑瓶口緊靠比色皿內(nèi)部，緩緩倒出液體，液體大約占全部的三分之二時(shí)，停止倒入，試劑瓶口緊靠比色皿口微提防止溶液倒出。并用吸水紙擦干。注意事項(xiàng)：1、拿取比色皿時(shí)只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃避免接觸光學(xué)面。同時(shí)注意輕拿輕放，防止外力對(duì)比色皿的影響，產(chǎn)生應(yīng)力后破

10、損。2、凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)的溶液不得長(zhǎng)期盛放在比色皿中。3、不能將比色皿放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤。4、當(dāng)發(fā)現(xiàn)比色皿里面被污染后，應(yīng)用無(wú)水乙醇清洗，及時(shí)擦拭干凈。5、不得將比色皿的透光面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時(shí)高度為比色皿的23處即可光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用鏡頭紙或絲綢擦拭。7.請(qǐng)闡述“黑體”與“參比”在分光光度儀校正中的作用，以及正確的校正操作方法；（以7200型可見(jiàn)光分光光度儀，用DNS法測(cè)定還原

11、糖為例，說(shuō)明如何進(jìn)行“黑體”與“參比”的校正操作？）黑體校正作用：完全擋住光線，使透光度調(diào)零。黑體校正：調(diào)到T檔，使透光率為0%。參比校正作用：消除DNS的顏色對(duì)測(cè)定的影響。參比校正：調(diào)到A或T檔校正都可，A檔調(diào)0%，T檔調(diào)100%。8.請(qǐng)闡述用分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量的基本操作步驟；并請(qǐng)闡述“兩表一圖”的含義。1.接通電源，打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，掀開(kāi)樣品室暗箱，預(yù)熱十分鐘。2.將靈敏度開(kāi)關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到零時(shí)，需選用較高檔）3.