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文檔簡介
1、基因的結(jié)構(gòu),基因的定義基因是DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。,基因的分類將編碼蛋白質(zhì)的基因根據(jù)其是否具有轉(zhuǎn)錄和翻譯功能可以把基因分為三類。具有轉(zhuǎn)錄和翻譯功能;只有轉(zhuǎn)錄功能而沒有翻譯功能的基因,包括tRNA基因和rRNA基因;不轉(zhuǎn)錄的基因,它對基因表達(dá)起調(diào)節(jié)控制作用,包括啟動基因和操縱基因。,,原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu),,IMN,,,,,,,,,,非編碼區(qū),,非編碼區(qū),編碼區(qū),編碼區(qū)上游,編
2、碼區(qū)下游,與RNA聚合酶結(jié)合位點,啟動子,終止子,,編碼區(qū),非編碼區(qū),編碼蛋白質(zhì) ,連續(xù)不間斷,不編碼蛋白質(zhì),但有調(diào)控作用,,,,真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu),,,編碼區(qū),非編碼區(qū),外顯子:能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子:不能編碼蛋白質(zhì)的序列,不編碼蛋白質(zhì),有調(diào)控作用,,,,,,,,,,,編碼區(qū),,非編碼區(qū),非編碼區(qū),啟動子,終止子,編碼區(qū)上游,編碼區(qū)下游,,,,,外顯子,內(nèi)含子,與RNA聚合酶結(jié)合位點,,IMN,,,,,非編碼序列,非編碼序列指不
3、編碼蛋白質(zhì)的序列。,真核生物的基因結(jié)構(gòu),mRNA前體,成熟的信使RNA,將內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的mRNA切割掉,,,,原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較,思考,編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì),原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎?,連續(xù),不連續(xù),編碼區(qū),非編碼,啟動子 .VS. 起始密碼/終止子 .VS. /終止密碼,存在分子:,作用:,DNA(基因),啟動/終止轉(zhuǎn)錄,mRNA,起始/終止翻譯,mRNA中存在啟動子/終止子的序列嗎?,?,指按
4、照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計,并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。,基因工程:,由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計和施工的,因此又叫DNA重組技術(shù)或基因拼接技術(shù)。,基因工程的概念,基因工程又叫做基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。通俗地說,就是按照人們的意愿,把一種生物的某種基因提取出來,加以修飾改造,然后放到另一種生物的細(xì)胞里,定向地改造生物的遺傳性狀。,基因拼
5、接技術(shù)或DNA重組技術(shù),生物體外,基因,DNA分子水平,人類需要的基因產(chǎn)物,剪切,→ 拼接,→ 導(dǎo)入,→ 表達(dá),基因重組,基因工程的概念,基因工程的誕生的基礎(chǔ)理論:,1、DNA是遺傳物質(zhì)的證明2、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立3、遺傳密碼的破譯,§1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具,(一)“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶,1、來源:,主要來自原核生物,2、特點:,具有專一性(特異性),表現(xiàn)在兩方面:,(1)識別雙鏈DN
6、A中特定核苷酸序列,(2)切割特定序列中的特定位點,3、作用:,特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,4、結(jié)果:,產(chǎn)生黏性末端或平末端,,重播,黏性末端:,,中軸線,,,,重播,平末端:,,中軸線,,,(二)“分子縫合針”——DNA連接酶,1、來源:,大腸桿菌、T4噬菌體,3、種類:,2、作用:,恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵,分類,,E.Coli DNA連接酶,T4 DNA連接酶,4、注意:連接酶有專一性,但沒有
7、識別特定核苷酸序列的特性!,(三).基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體,,常用的運載體:,質(zhì)粒(最常用)、 λ噬菌體的衍生物或動、植物病毒等。,質(zhì)粒:,質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體。質(zhì)粒是獨立于細(xì)菌擬核之外的有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。有的一個細(xì)菌中有一個,有的一個細(xì)菌中有多個。,,,注意:作為載體的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上經(jīng)過人工改造的!,質(zhì)粒作為“分子運輸車”的條件是①能夠自我復(fù)制 ②有一個或多個限制酶切位點
8、0;③有標(biāo)記基因,,,作為運載體必須具備的條件?,1)能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。2)載體DNA必須有一個或多個限制酶切點,以便目的基因插入到載體上去。3)具有某些標(biāo)記基因,便于進(jìn)行篩選。如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因等。載體DNA必須是安全的,不會對受體細(xì)胞有害,或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去;5) 載體DNA分子大小應(yīng)適合,以便提取和在體外進(jìn)行操作,太大就不便操作.,基因工程的基本操作程序,
9、目的基因的獲取,基因表達(dá)載體的構(gòu)建,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,操作過程,目的基因的檢測與鑒定,,一 目的基因的獲取,,IMN,(一)目的基因:,編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因;,(二)獲取目的基因的常用方法,從自然界已有的物種中分離,,用人工的方法合成,,目前常用的獲得目的基因的方法,1)從基因文庫中獲取目的基因,2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因3)(用化學(xué)方法直接)人工合成,若基因_____,核苷酸序列______ 。,較小,已知,,獲得目的基因
10、的方法,1)從基因文庫中獲取目的基因,1. 基因文庫?,種類:,,基因組文庫:,如:cDNA文庫:,含有一種生物的全部基因,含有一種生物的部分基因,根據(jù)基因的有關(guān)信息:如基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA,部分基因文庫:,3.怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因?,2.如何構(gòu)建基因文庫?,基因文庫的構(gòu)建方法,直接分離法,供體細(xì)胞中的DNA,許多DNA片段,運載體,限制酶,,,受體細(xì)胞,產(chǎn)生特
11、定性狀,導(dǎo)入,外源DNA擴(kuò)增,,,目的基因,分離,,(鳥槍法),一、目的基因的獲取,(一)從基因文庫中直接獲取,,,多用于原核生物,cDNA文庫的構(gòu)建-----反轉(zhuǎn)錄法: 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板,反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA,然后在酶的作用下合成雙鏈DNA,從而獲得所需的基因。,目的基因的mRNA,單鏈DNA,反轉(zhuǎn)錄酶,,,DNA聚合酶,雙鏈DNA(目的基因),,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,PCR技術(shù)—多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),
12、原理:前提:條件:,PCR擴(kuò)增儀,DNA雙鏈復(fù)制的基本原理,一段已知目的基因的核苷酸序列,四種脫氧核苷酸,一對引物,熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶),DNA的兩條鏈為模板,溫度控制,PCR的過程:,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,變性(90-95℃),復(fù)性(55-60℃),,,延伸(70-75℃),,二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ——基因工程的核心,1、目的:,使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代
13、,同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。,2、基因表達(dá)載體的組成:,復(fù)制原點+目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因,三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,- 轉(zhuǎn)化,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法,受體細(xì)胞,,,,植物cell,動物cell,微生物cell,,Ca2+處理(改變細(xì)胞壁的通透性),顯微注射技術(shù)(受精卵),感受態(tài)法,(適用于單子葉植物),(雙子葉植物和裸子植物),(雙子葉植物),轉(zhuǎn)化-目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)
14、化。,,四、目的基因的檢測與鑒定,——檢查是否成功,檢測—,鑒定—,,①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA 上是否插入了目的基因,②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等,方法——,方法——,方法——,DNA分子雜交,分子雜交,抗原-抗體雜交,,即個體生物學(xué)水平的鑒定,檢測目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵,1.3基因工程的應(yīng)用,植物基因工程動物基因工程基因工程藥物基
15、因治療,植物基因工程:用于提高農(nóng)作物的抗逆能力及改良農(nóng)作物的品質(zhì)和利用植物生產(chǎn)藥物等。,1)抗蟲轉(zhuǎn)基因植物,2)抗病轉(zhuǎn)基因植物,3)其他抗逆轉(zhuǎn)基因植物,4)利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì),植物基因工程碩果累累,1、抗蟲轉(zhuǎn)基因植物,已問世的轉(zhuǎn)基因抗蟲植物:,,棉、玉米、馬鈴薯、番茄、大豆、蠶豆、煙草、蘋果、核桃、楊、菊花、和白花三葉草等。,用于殺蟲的基因主要有:,★Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝聚素基因,植物基因工程
16、碩果累累,2、抗病轉(zhuǎn)基因植物,已問世的轉(zhuǎn)基因抗病植物:,小麥、甜椒、番茄。,用于抗病的基因主要有:,★病毒外殼蛋白質(zhì)基因、病毒復(fù)制酶基因(這些基因的轉(zhuǎn)化植物表現(xiàn)出對同種病毒或相近病毒或病毒RNA侵染的高水平抗性 )幾丁質(zhì)酶基因、抗毒素合成基因,抗CMV甜椒,植物基因工程碩果累累,3、(其它)抗逆轉(zhuǎn)基因植物,例如,將魚的抗凍蛋白基因?qū)藷煵莺头?,使煙草和番茄的耐寒能力均有提高。此外,將抗除草劑基因?qū)舜蠖?、玉米等作物,噴灑除草劑時,殺
17、死田間雜草而不損傷作物。,植物基因工程碩果累累,4、利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì),提高植物的光合作用效率 改造光合作用中起關(guān)鍵作用的CO2固定酶,能提高植物對CO2的固定效率;還可以通過增強(qiáng)植物對光能吸收與轉(zhuǎn)化的功能來提高光合作用效率,提高作物的產(chǎn)量。,動物基因工程前景廣闊,1、用于提高動物的生長速度,轉(zhuǎn)基因鯉魚(上)和同齡的鯉魚(下),2)用于改善畜產(chǎn)品的品質(zhì),3)用轉(zhuǎn)基因的動物生產(chǎn)藥物,4)用轉(zhuǎn)基因動物作器官移植的供體,基
18、因工程藥品 —— 胰島素,基因工程藥品 —— 干擾素,基因工程藥品 —— 乙肝病毒疫苗,基因治療曙光初照,體外途徑的步驟?體內(nèi)途徑的步驟?,,,基因工程與環(huán)境監(jiān)測(一),基因工程做成的DNA探針能夠十分靈敏地檢測環(huán)境中的病毒、細(xì)菌等污染。,1t水中只有10個病毒也能被DNA探針檢測出來,蛋白質(zhì)工程的流程,基因DNA,氨基酸序列多肽鏈,蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu),預(yù)期功能,生物功能,mRNA,轉(zhuǎn)錄,翻譯,折疊,DNA合成,分子設(shè)計,,,,,,
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