糞便檢驗(yàn) (keyonh)

1、糞 便 檢 驗(yàn) 第八組,糞便檢查主要用于協(xié)助診斷消化道疾?。?、腸道感染性疾病；2、腸道寄生蟲感染；3、消化道出血鑒別與腫瘤篩檢；4、了解胃腸道消化、吸收功能；5、黃疸的鑒別診斷。,糞便成分主要有：1、未被消化的食物殘?jiān)?、已被消化但未被吸收的食糜；3、消化道分泌物；4、分解產(chǎn)物；5、腸壁脫落的上皮細(xì)胞；6、細(xì)菌，如大腸埃希氏菌、腸球菌 和一些過(guò)路菌；,第一節(jié) 標(biāo)本采集和處理,一、標(biāo)本容器

2、 盛標(biāo)本的容器應(yīng)清潔、干燥、有蓋、無(wú)吸水和滲漏。細(xì)菌學(xué)檢查，糞便標(biāo)本應(yīng)采集于滅菌、有蓋的容器內(nèi)。,二、標(biāo)本采集標(biāo)本新鮮，盛器清潔、干燥。選取有病理意義的標(biāo)本，多點(diǎn)取樣。及時(shí)檢測(cè)，標(biāo)本采集后于1小時(shí)內(nèi)檢測(cè) 完畢。,寄生蟲檢測(cè)應(yīng)多次取樣，并注意取樣方式。阿米巴滋養(yǎng)體等原蟲檢測(cè)，應(yīng)及時(shí)、保溫送 檢。糞便隱血檢測(cè)應(yīng)于試驗(yàn)前素食三天，并禁服 鐵劑、及維生素。,第二節(jié) 理學(xué)檢查,1、糞便量2、糞便外觀

3、顏色：正常人糞便呈黃褐色，嬰 兒糞便呈黃綠色或金黃色糊狀。 常見(jiàn)顏色的改變見(jiàn)下表：,性狀：正常人糞便為成形軟便，嬰兒為糊狀便。病理狀態(tài)時(shí)，糞便性狀可發(fā)生改變。,（1）稀糊狀或稀汁樣便：常因細(xì)菌腸毒素、內(nèi)源性促分泌物質(zhì)、致瀉物質(zhì)等物質(zhì)刺激腸道，導(dǎo)致腸蠕動(dòng)亢進(jìn)或腸液分泌增多所致。多見(jiàn)于各種感染和非感染性腹瀉，尤其是急性胃腸炎。 （2）膿性及膿血便：常見(jiàn)于下消化道病變、各種腸炎、痢疾、急性血吸蟲病，結(jié)腸或直腸癌，慢性潰

4、瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核。 （3）米苷樣便：呈白色陶米水樣，多見(jiàn)于霍亂、副霍亂，為白色淘米水樣。,,（4）柏油樣便：因上消化道出血所致，隱血試驗(yàn)強(qiáng)陽(yáng)性。 （5）白陶土樣便：主要見(jiàn)于阻塞性黃疸及鋇餐造影術(shù)后。 （6）鮮血便：見(jiàn)于直腸息肉，結(jié)腸癌、肛裂、痔瘡。 （7）胨狀便：見(jiàn)于慢性菌痢及過(guò)敏性腸炎。,（8）黏液便：粘液混勻于糞便中，見(jiàn)于小腸病變；粘液非混勻于糞便中且較集中，見(jiàn)于大腸病變；粘液粘附于糞便表面，常見(jiàn)于直腸炎；透明膠凍樣粘

5、液附于糞便表面時(shí)，見(jiàn)于粘液性腸炎、痙孿性便秘、情緒激動(dòng)等。,3、寄生蟲蟲體 糞便中如有蟲體較大的腸道寄生蟲蠕蟲，如蛔蟲、蟯蟲、絳蟲等或其片段，肉眼可見(jiàn)。鉤蟲蟲體需篩洗糞便后才見(jiàn)。,4、氣味 糞便的臭味與進(jìn)食的種類，疾病的性質(zhì)有關(guān)。 病理情況：糞便惡臭一般見(jiàn)于慢性腸炎、胰腺疾病、消化道大出血、結(jié)腸或直腸癌；糞便魚腥臭味見(jiàn)于阿米巴性腸炎；糞便酸臭味見(jiàn)于消化、吸收不良。,第三節(jié) 顯微鏡檢查及其臨床意義,顯微鏡檢查內(nèi)容主要包括寄生

6、蟲蟲卵、原蟲、細(xì)胞、真菌、結(jié)晶、食物殘?jiān)取?（二）糞便中各有形成分的形態(tài)和意義 1、細(xì)胞1）紅細(xì)胞：正常糞便無(wú)紅細(xì)胞。上消化道出血時(shí)，紅細(xì)胞被破壞，糞便中難以見(jiàn)到。下消化道炎癥或出血時(shí)可出現(xiàn)數(shù)量不等的紅細(xì)胞，如痢疾、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸癌、直腸息肉、痔瘡、急性血吸蟲病等。,消化道疾病時(shí)由于炎病損傷出血，白細(xì)胞、紅細(xì)胞同時(shí)存在。細(xì)菌性痢疾時(shí)紅細(xì)胞少于白細(xì)胞，多分散存在且形態(tài)正常；阿米巴痢疾者紅細(xì)胞多于白細(xì)胞，多粘連成堆存在并有殘碎

7、現(xiàn)象。,2）白細(xì)胞（膿細(xì)胞） 糞便中的白細(xì)胞常見(jiàn)中性粒細(xì)胞。病理情況下，中性粒細(xì)胞呈灰白色，胞體腫脹、壞死、破碎、結(jié)構(gòu)不完整，胞質(zhì)內(nèi)充滿細(xì)小的顆粒，核不清楚的中性粒細(xì)胞，常成堆出現(xiàn)，此時(shí)稱為“膿細(xì)胞”,正常糞便，無(wú)或偶見(jiàn)白細(xì)胞。結(jié)腸炎，白細(xì)胞分散存在，一般少于15個(gè)/HFP；細(xì)菌性痢疾、潰瘍性結(jié)腸炎時(shí)，可見(jiàn)大量的白細(xì)胞或成堆出現(xiàn)的膿細(xì)胞以及吞有異物的小吞噬細(xì)胞；腸易激綜合癥、腸道寄生蟲病時(shí)可見(jiàn)較多的嗜酸性粒細(xì)胞，可伴有夏科-萊登結(jié)

8、晶。,3）巨噬細(xì)胞：常隨膿細(xì)胞出現(xiàn)于急性菌痢的糞便中，潰瘍性結(jié)腸炎時(shí)，亦可偶見(jiàn)。 4）腸黏膜上皮細(xì)胞：見(jiàn)于結(jié)腸炎癥、偽膜性腸炎。5）腫瘤細(xì)胞：乙狀結(jié)腸癌、直腸癌病人的血性糞便，及時(shí)涂片染色（瑞氏或HE染色）可找到成堆體積大，形態(tài)異常的腫瘤細(xì)胞。,2、寄生蟲卵、原蟲、滴蟲①寄生蟲卵：糞便中檢查寄生蟲卵是診斷腸道寄生蟲感染的最常用的指標(biāo)。 糞便中常見(jiàn)的寄生蟲卵有：蛔蟲卵、鉤蟲卵、鞭蟲卵、蟯蟲卵、華枝睪吸蟲卵、血吸蟲卵、姜片蟲卵和帶絳

9、蟲卵等。②原蟲和滴蟲：腸寄生原蟲包括阿米巴原蟲、隱孢子蟲、鞭毛蟲、纖毛蟲和人芽囊原蟲等。,3、結(jié)晶糞便中檢出夏科-雷登結(jié)晶，主要見(jiàn)于阿米巴痢疾、鉤蟲病以及過(guò)敏性腸炎，并同時(shí)見(jiàn)到嗜酸性粒細(xì)胞。4、食物殘?jiān)?在正常糞便中，食物殘?jiān)狄殉浞窒蟮臒o(wú)定形細(xì)小顆粒。未經(jīng)充分消化的食物殘?jiān)Ｒ?jiàn)的有以下幾種： ①脂肪小滴②淀粉顆粒③肌肉纖維④結(jié)締組織⑤植物纖維及植物細(xì)胞,第四節(jié) 化學(xué)檢查及其臨床意義,一、隱血試驗(yàn) 概念

10、：隱血是指上消化道有少量出血時(shí)（每日出血量少于5ml），而且紅細(xì)胞因被消化分解,肉眼不見(jiàn)糞便改變顏色，并且糞便涂片顯微檢查未能檢出紅細(xì)胞。而需用其他間接方法才能證實(shí)的出血。 隱血試驗(yàn)的方法有化學(xué)法和免疫法兩種 。,1、化學(xué)法隱血試驗(yàn)（OBT）試驗(yàn)原理：血紅蛋白中含鐵血紅素具有過(guò)氧化物酶的活性，能分解過(guò)氧化物，催化色原物質(zhì)而呈色，呈色的深淺反映了血紅蛋白的含量，即出血量的多少。常用方法：主要有鄰聯(lián)甲苯胺法，聯(lián)苯胺法，匹拉米洞法，愈創(chuàng)

11、木酯法等。,假陽(yáng)性情況：如外源性干擾；假陰性情況：如外源性與內(nèi)源性干擾,聯(lián)苯胺法【原 理】 于糞便內(nèi)加入易被氧化的物質(zhì)（聯(lián)苯胺等）及放氧的物質(zhì)（H2O2）,經(jīng)糞便內(nèi)血液的作用（血色素中的鐵卟啉環(huán)有過(guò)氧化酶作用）分解過(guò)氧化氫放出O2-，使聯(lián)苯胺被氧化而致顏色。【檢查方法、結(jié)果及優(yōu)缺點(diǎn)】 1.方法 聯(lián)苯胺法 無(wú)色孔雀綠法 單克隆抗體OB試驗(yàn) 取聯(lián)苯胺粉少許置

12、于玻片上，滴加冰醋酸 2-3滴，再加3% H2O2 2滴，取糞便少許與 以上試劑混勻，觀察結(jié)果。,,2、免疫法隱血試驗(yàn)原理：該試驗(yàn)所有的抗體可分為兩類，一種為抗人血紅蛋白抗體，另一種為抗人紅細(xì)胞基質(zhì)抗體。常用方法有免疫單擴(kuò)法、對(duì)流免疫電泳、免疫擴(kuò)散法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、反向間接血凝法等。,免疫法不必控制飲食，且敏感性和特異 性都高于化學(xué)法。假陽(yáng)性情況：高靈敏度可造成假陽(yáng)性， 故不宜用于日常篩檢。假陰性情

13、況：主要檢測(cè)下消化道出血， 以及帶現(xiàn)象。,臨床意義：糞便隱血試驗(yàn)主要用于消化道出血、消化道腫瘤的篩檢和鑒別。隱血陽(yáng)性： 1、見(jiàn)于消化道出血、藥物致胃粘膜損傷（如服用阿司匹林、糖皮質(zhì)激素）、腸結(jié)核、克羅思病、胃?。ㄎ笣?、胃炎）、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸息肉、鉤蟲病及腎病綜合癥出血熱、消化道惡性腫瘤等。,2、消化性潰瘍與腫瘤出血的鑒別：隱血試驗(yàn)對(duì)消化道潰瘍的陽(yáng)性診斷率為40-70％，呈間斷性陽(yáng)性；而消化道惡性腫瘤診斷陽(yáng)性率可達(dá)95％，

14、且呈持續(xù)性陽(yáng)性。,第五節(jié) 糞便的細(xì)菌學(xué)檢查,正常人的腸道中棲居大量的不同種類的微生物，組成人類健康極為重要的體內(nèi)微生態(tài)環(huán)境——參與營(yíng)養(yǎng)、消化、吸收及清潔腸道，維護(hù)健康的作用。腹瀉因病原菌或病毒在在腸道繁殖引發(fā)，引起 腹瀉細(xì)菌種類多。本實(shí)驗(yàn)主要介紹疑為沙門菌或志賀菌屬感染者 或帶菌者的糞便標(biāo)本（或直腸拭子）中致病菌 的分離和鑒定。,,由于腸道中存在大腸埃希菌等很多條件致病菌，其與腸道致病菌的主要區(qū)別之一

15、是：大多數(shù)條件致病菌可分解乳糖，而絕大多數(shù)腸道致病菌則不分解乳糖。分離腸道致病菌多用含乳糖的弱選擇性鑒別培養(yǎng)液（如麥康凱瓊脂等）以及對(duì)大腸埃希菌等條件致病菌有較強(qiáng)抑制作用、而又有利于腸道某些致病菌（如沙門菌及志賀菌屬）生長(zhǎng)繁殖的強(qiáng)選擇性鑒別培養(yǎng)液。,,糞便標(biāo)本常見(jiàn)的病原菌：■G＋菌：葡萄球菌屬、白色假絲酵母菌、艱難梭菌、結(jié)核分枝桿菌、蠟樣芽孢桿菌■G－菌：志賀菌、沙門菌、致病性大腸埃希菌、霍亂弧菌、親水氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌

16、、彎曲菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌,試劑與器材,菌株：傷寒沙門菌 培養(yǎng)基：麥康凱和SS瓊脂平板 各種生化反應(yīng)培養(yǎng)液及革蘭氏染液等試劑（可參見(jiàn)微生物的自動(dòng)分析及附錄） 沙門菌多價(jià)“O”（A-F組）及單價(jià)“O”診斷血清、“H”因子診斷血清,標(biāo)本的采集,由于糞便中細(xì)菌種類很多，故應(yīng)根據(jù)檢查目的的不同選擇適宜的培養(yǎng)液或用適當(dāng)方法處理，盡可能地抑制雜菌，以利于病原菌的檢出。不能認(rèn)為糞便中細(xì)菌含量多，糞便標(biāo)本的采集就無(wú)須無(wú)菌操作。糞便標(biāo)本

17、的采集也應(yīng)遵循無(wú)菌操作的原則。若便器或標(biāo)本容器不潔而污染了變形桿菌，就可能影響病原菌的分離檢出，甚至把污染菌誤報(bào)，造成誤診。,標(biāo)本的采集,采樣的時(shí)期應(yīng)合適。疑似痢疾患者應(yīng)在發(fā)病初期、用藥前采取標(biāo)本。糞便標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)挑取無(wú)尿液污染的有膿血、黏液部分的糞便2—3g（液狀糞便可挑取絮狀物），盛于無(wú)菌容器內(nèi)送檢。在無(wú)法獲得糞便時(shí)，可采用直腸拭子，即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養(yǎng)液濕潤(rùn)后，插入肛門內(nèi))4—5cm處，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一圈后取出

18、，插入無(wú)菌試管（Cary Blair系統(tǒng)運(yùn)送管）或保存液中送檢；疑似傷寒患者應(yīng)在發(fā)病2—3周內(nèi)采集糞便標(biāo)本。,標(biāo)本的采集,在無(wú)法獲得糞便時(shí)，可采用直腸拭子，即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養(yǎng)液濕潤(rùn)后，插入肛門內(nèi))4—5cm處，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一圈后取出，插入無(wú)菌試管（Cary Blair，卡—布系統(tǒng)運(yùn)送管）或保存液中送檢；應(yīng)采集可疑糞便，如立即患者粘液膿血便、霍亂患者的米泔水樣便等。以為換亂患者，硬質(zhì)堿性蛋白胨水中。除嬰幼兒外，

19、不推薦用棉拭子做常規(guī)病原菌培養(yǎng)。糞便標(biāo)本如不能立即送檢，可將標(biāo)本放入甘油鹽水保存液中，或保存于冰箱內(nèi)（勿超過(guò)2小時(shí)）。,糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序,糞便標(biāo)本或肛拭子道標(biāo)本,涂片,增菌培養(yǎng),直接分離,,,,,,,報(bào)告,,革蘭染色；動(dòng)力學(xué)觀察與制動(dòng)試驗(yàn)（KIA、MIU）,初步報(bào)告,,,,需氧培養(yǎng),,,,,GN增菌液或亞硒酸增菌液,堿性蛋白胨,,TCBS平板或其它堿性平板分離,,,SS平板MAC平板EMB平板,,,,,副溶血性弧菌選擇平板,菌

20、落形態(tài)生化反應(yīng),菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、抗血清凝集藥敏,,,菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、抗血清凝集藥敏,,,,步驟與方法,革蘭氏染色志賀菌與沙門菌：急性腹瀉患者的糞便標(biāo)本劃線接種于SS平板和MAC平板。慢性腹瀉患者志賀菌或攜帶者應(yīng)接種GN增菌液，沙門菌接種亞硒酸鹽增菌液，再轉(zhuǎn)種SS平板與MAC平板，觀察小的、透明或半透明、無(wú)色或淺黃色的可以菌落生長(zhǎng)，有時(shí)SS平板可見(jiàn)中心黑色菌落（H2S）。挑選三個(gè)可疑菌落分別接種三支KIA、MIU培養(yǎng)基，觀察

21、結(jié)果。挑取菌落進(jìn)行革蘭氏染色，觀察細(xì)菌形態(tài)、排列。采用傷寒沙門菌診斷血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定。,步驟與方法,生化反應(yīng)鑒定第2日觀察平板上有無(wú)可疑菌落，用接種針于上述平板中挑取單個(gè)可疑菌落（無(wú)色、半透明、光滑、較小）2—3個(gè)，分別接種至2—3管雙糖培養(yǎng)液內(nèi)，置37℃培養(yǎng)18—24h。第3日觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，根據(jù)表10—2初步鑒定細(xì)菌種類，然后取雙糖培養(yǎng)液上 的菌落進(jìn)行系列生化鑒定。 表 不同腸道細(xì)菌在雙糖培養(yǎng)液培養(yǎng)結(jié)果（教學(xué)實(shí)驗(yàn)

22、模擬標(biāo)本的結(jié)果） 序號(hào) 上層（乳糖） 下層（葡萄糖） 動(dòng)力 可能結(jié)果 1 + + 有 大腸埃希菌 2 — + 有 傷寒沙門菌 3 — +

23、 無(wú) 痢疾志賀菌,步驟與方法,血清學(xué)最終鑒定根據(jù)雙糖培養(yǎng)液及系列生化反應(yīng)結(jié)果判斷，最后利用血清學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行最后的確定。 如果初步鑒定結(jié)果為沙門菌屬，則取雙糖培養(yǎng)液斜面上菌苔與沙門菌多價(jià)“O”（A-F組）診斷血清作玻片凝集實(shí)驗(yàn)，如凝集即為沙門菌屬，然后分別與A-F組的單價(jià)“O”診斷血清作玻片凝集實(shí)驗(yàn)定組，最后以H因子診斷血清作玻片凝集實(shí)驗(yàn)以定型（種），必要時(shí)可用因子診斷血清定型。 如果根據(jù)

24、雙糖培養(yǎng)液及系列生化反應(yīng)結(jié)果判斷，初步鑒定結(jié)果為志賀菌屬，則取菌苔與志賀菌屬多價(jià)診斷血清作玻片凝集實(shí)驗(yàn)以定組，必要時(shí)可用因子診斷血清定種或型。,步驟與方法,若為較典型的沙門菌生化反應(yīng)，但與A-F組多價(jià)“O”診斷血清又不發(fā)生凝集反應(yīng)，應(yīng)考慮可能為有VI抗原的沙門菌，可將菌制成懸液以100℃加熱30分鐘以除去VI抗原后，再做血清學(xué)鑒定。如為較典型的志賀菌生化反應(yīng)又不與其多價(jià)診斷血清發(fā)生凝集，則可用同樣方法加熱100℃1小時(shí)以破壞其K抗原，

25、再做玻片凝集反應(yīng)鑒定之。在細(xì)菌的血清鑒定中，最常使用的方法是凝集反應(yīng)，其基本原理是細(xì)菌為顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)的抗體混合時(shí)，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。,步驟與方法,取一潔凈載玻片，用記號(hào)筆劃兩個(gè)1—1.5cm的圓圈。 取1：5或1：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對(duì)照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應(yīng)適當(dāng)多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時(shí)間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。

26、用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細(xì)菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)玻片數(shù)次，1—3分鐘后觀察結(jié)果。 按上述操作方法，依次分別做A-E多價(jià)血清定屬，特異性O(shè)因子血清定群，H因子血清定型（或種）。,結(jié)果,陰性：對(duì)照側(cè)及實(shí)驗(yàn)側(cè)均勻混濁不出現(xiàn)凝集。 陽(yáng)性：鹽水對(duì)照側(cè)呈現(xiàn)均勻混濁，實(shí)驗(yàn)側(cè)明顯凝集。 自凝：對(duì)照側(cè)及實(shí)驗(yàn)側(cè)均出現(xiàn)凝集。,步驟與方法,取一潔凈載玻片，用記號(hào)筆劃兩個(gè)1—1.5cm的圓圈。 取1：5或1

27、：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對(duì)照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應(yīng)適當(dāng)多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時(shí)間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。 用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細(xì)菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)玻片數(shù)次，1—3分鐘后觀察結(jié)果。 按上述操作方法，依次分別做A-E多價(jià)血清定屬，特異性O(shè)因子血清定群，H因子血清定型（或種）見(jiàn)p119。,注意事項(xiàng),在細(xì)菌的血清

28、鑒定中，最常使用的方法是凝集反應(yīng)，其基本原理是細(xì)菌為顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)的抗體混合時(shí)，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。 玻片法凝集實(shí)驗(yàn)是用診斷血清在玻片上與待測(cè)細(xì)菌相混合，在電解質(zhì) 存在下，若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集小塊即為陽(yáng)性，表示該菌為所用抗體的相應(yīng)細(xì)菌。此法是一種定性實(shí)驗(yàn)，方法簡(jiǎn)便快速，特異性強(qiáng)。可用于鑒定菌種及菌型。用于鑒定細(xì)菌的診斷血清有以下幾種： 多價(jià)診斷血清：即混合診斷血清。該血清含