利多卡因?qū)Τ赡甏笫蠛ｑRca,1區(qū)錐體細(xì)胞l型ca39;2單通道特性的影響

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文利多卡因?qū)Τ赡甏笫蠛ｑRCA區(qū)錐體細(xì)胞L-型Ca單通道特性的影響姓名：張慶國申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：徐世元20030527入裝有2 m l 低鈣緩沖液的試管中，用三根尖端經(jīng)火拋光的P a s t e u r 吸管梯度吹打使細(xì)胞游離。吹打好的細(xì)胞懸液靜置3 m i n ，吸取中層滴加于蓋玻片上，粘附1 0 ～1 5 m i n 。倒掉未粘附上的組織碎片和細(xì)胞，將蓋玻片放入加有1 ～2 “浴槽液的記

2、錄浴槽中即可進(jìn)行離子通道記錄。( 二) 采用膜片鉗技術(shù)的細(xì)胞貼附記錄模式進(jìn)行離子通道記錄。匯錄采用細(xì)胞貼附( C e l l —a t t a c h e d ) 記錄模式，微電極用電極拉制器拉制，入水電阻為6 ～9 M Q ，封接電阻大于5 G Q 。放大器反饋電阻設(shè)置為5 0 G D ，低通濾波頻率為l k H z ，采樣頻率5 k H z ，間隔5 s 。用去極化脈沖對(duì)c a 2 + 通道進(jìn)行激活，用p C L A M P ( v

3、 e r s i o n 8 ．0 ，A x o nI n s t r u m e n t s )C l a m p e x 程序進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，用F e t c h a n 和p S T A T 對(duì)離子通道進(jìn)行分析。首先鑒定和觀察海馬神經(jīng)元上L 一型c a ”通道的基本電生理學(xué)和藥理學(xué)特性。利多卡因經(jīng)微量加樣器依次加入浴槽液中，濃度逐次累加形成6 個(gè)終濃度( 0 、2 、4 、8 、1 6 、3 2 I x g ／m 1 ) ，記錄不同

4、濃度下利多卡因?qū) 一型c a ”單通道活動(dòng)的影響，資料存入硬盤以備分析和進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處彈。三、結(jié)果：( 一) 分離出的成年大鼠海馬C A l 區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征保存完好，符合實(shí)驗(yàn)條件的細(xì)胞游離、呈錐形、活性好、貼壁好，整個(gè)細(xì)胞胞膜清晰、胞體透亮、胞漿均勻一致并保存有較長的軸突、樹突，軸突可長達(dá)2 0 0 u m 以上?；钚约?xì)胞還保存了L ．型C a 2 + 通道的基本電生理學(xué)和藥理學(xué)特性，易于鑒別。( 二) 低濃度利多卡因( 2 、4

5、“∥戚) 對(duì)L ．型C a 2 + 通道的活動(dòng)無明顯影響；濃度達(dá)8 、1 6 “g ／r m 時(shí)，L 一型C a 2 + 通道平均開放時(shí)間由對(duì)照6 ．1 0±0 ．2 5 m s 分別增加到8 ．1 2 ±0 ．3 0 m s ( P < 0 ．0 5 ) 、7 ．7 1 ±0 ．5 4 m s ( P < 0 ．0 5 ) ，濃度達(dá)3 2 “g ／m l 時(shí)，開放時(shí)間反而降至4 ．8 9 &#

6、177;0 ．2 2m s ( P < 0 ．0 5 ) ；濃度為8 、1 6 、3 2I ．t g ／m l 時(shí)，整體平均電流分別為0 ．8 0 4 ±0 ．0 9 2p A ( P < O ．0 5 ) 、0 ．6 6 8 ±O ．0 7 3p A ( 尸< O ．0 5 ) 、0 ．3 7 0 ±0 ．0 5 2p A ( P < O ．0 5 ) ；當(dāng)利多卡因達(dá)到一定濃度(