基于新型分子信標(biāo)和胸腺嘧啶汞(ⅱ)配位作用的dna和hg39;2檢測技術(shù)研究

1、華東師范大學(xué)博士學(xué)位論文基于新型分子信標(biāo)和胸腺嘧啶-汞（Ⅱ）配位作用的DNA和Hg檢測技術(shù)研究姓名：吳繼魁申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：何品剛;方禹之20100401標(biāo)記物胭脂紅酸，自身能夠形成莖．環(huán)結(jié)構(gòu)的單鏈寡核苷酸組成( 簡稱為C A s ．M B ) 。C A s ．M B 在關(guān)閉狀態(tài)時(shí)，兩端標(biāo)記的胭脂紅酸單體在莖部互補(bǔ)序列的作用下相互接近，并形成二聚體，從而導(dǎo)致電化學(xué)信號的淬滅；與完全互補(bǔ)目標(biāo)D N A 序列雜交時(shí)，

2、C A s ．M B 將發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)換，即由自由卷曲的莖．環(huán)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換為剛性的D N A 雙鏈，胭脂紅酸二聚體變?yōu)閱误w，從而恢復(fù)了胭脂紅酸單體的電信號。C A s ．M B 的電化學(xué)信號強(qiáng)度與完全互補(bǔ)目標(biāo)D N A 序列的濃度在O ．0 6 ．1 ．4 p M范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為O ．9 9 8 ，檢出限為3 0 l l M 。該電化學(xué)分子信標(biāo)能夠像傳統(tǒng)的熒光分子信標(biāo)一樣有效地識別單堿基錯配。C A s ．M B 有望直接應(yīng)用于

3、精確地基因分析。第三章基于非標(biāo)記分子信標(biāo)修飾的金膠納米探針的非交聯(lián)性聚集比色檢測單核苷酸多態(tài)性基于非標(biāo)記分子信標(biāo)( L a b e l _ 丘e em 0 1 e c u l a rb e a c o 璣L M B ) 修飾的金膠納米顆粒( 加l N P s ) 的非交聯(lián)聚集，本章構(gòu)建了一種新型比色檢測單核苷酸多態(tài)性的方法。該方法將莖一環(huán)結(jié)構(gòu)的分子信標(biāo)高特異性識別力和金膠納米顆粒聚集變色的光學(xué)特性有機(jī)結(jié)合在一起，實(shí)現(xiàn)了單核苷酸多態(tài)性的比

4、色檢測。利用金膠納米的自組裝技術(shù)將巰基修飾的分子信標(biāo)探針固定到金膠表面制備分子信標(biāo)修飾的金膠納米探針( A u N P s ．L M B ) 。當(dāng)加l N P s ．L M B 與不同的目標(biāo)序列( 野生型或突變型) 雜交時(shí)，金膠表面的L M B 的構(gòu)象由莖．環(huán)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換為具有一定剛性的雙鏈并引起金膠體系熵、焓的差異性；在適當(dāng)鹽度條件下，—6 心P s ．L M B 對不同目標(biāo)序列的識別導(dǎo)致金膠納米顆粒不同程度的聚集，從而實(shí)現(xiàn)對S N P

5、s 的識別。將該比色傳感體系應(yīng)用于P 5 3 基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測，結(jié)果令人滿意。第四章基于多胸腺嘧啶寡核苷酸修飾的金電極高靈敏伏安檢測汞離子利用胸腺嘧啶( t h v m i I l e ，T ) 與汞離子的高親和識別作用和電化學(xué)溶出技術(shù)，本章設(shè)計(jì)了一種具有高靈敏度和高選擇性的汞離子生物傳感器一多胸腺嘧啶寡核苷酸修飾的金電極即P o 蟣h y m i n eo l i g o n u c l e o t i d e ／A u 電