葡萄穗霉stachybotryssp.的分離鑒定及其β葡萄糖苷酶的性質(zhì)分析

1、Y7 7 3 9 2 3分類號(hào)南級(jí)絮目巖弋夭等。碩士學(xué)位論文單位代碼：1 0 0 l 9學(xué) 弓：S 0 2 4 0 4葡萄穗霉( S t a c h y b o t r y ss p ．) 的分離鑒定及其1 3 一葡萄糖苷酶的性質(zhì)分析I s o l a t i o na n d I d e n t i f i c a t i o n o f S t a c h y b o t r y ss p ．a(chǎn) n dC h a r a c t e

2、 r i z a t i o no f I t s 0 一g l u c o s i d a s e研 究 牛：指 導(dǎo) 教 師：合作指導(dǎo)教師：申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別：專 業(yè) 名 稱：研 究 方 向：所 在 學(xué) 院：夔噓星奎至j 金 麴援奎 題 塾援一堡堂亟±徽生物堂微生塑生理堂生物堂醫(yī)2 0 0 5 年6 月A b s t r a c tI no r d e rt o o b t a i nt h ef I l n g is t r

3、 a i n sw h i c h m a yh y d r o l y z ec e l l u l o s ew i t hh i g he f f i c i e n c y , 4 5s o i ls a m p l e sw e ∞c o l l e c t e df r o md i f f e r e n tp l a c e so fX i n j i a n gA u t o n o m o sR e g i o n

4、．4 0 f u n g is t r a i n s t h a t u t i l i z e dc e l l u l o s ea s t h eu n i q u ec a r b o n c o u r s ew e 他g a i n e d ．9s t r a i n ss e c r e t e dc e l l u l a s ea n dp g l u c o s i d a s ew e r ed e t e r

5、m i n e d ．T h e c e l l u l a s ea n d 爭(zhēng)g l u c o s i d a s e a c t i v i t yi nt h es t r a i nX 2 0 - 2 w a s t h eh i g h e s to n e ．T h er D N A f r a g m e n t i n c l u d i n g 1 8 Sr D N A ( 1 7 8 5 b p ) ，s ．8

6、Sr D N A ( 1 3 7 b p ) a n dt w oi n t e m a lt r a n s c r i p ts p a c e s ( I T S Ia n dI T S 2 ，4 6 8 b p ) o f s t r a i nX 2 0 - 2w e r e s e q u e c e d ．A f t e rc o m p a r i n gw i t hr e l a t e ds t r a i n s

7、i nG e n B a n k , t h es e q u e n c eh o m o l o g yo f1 8 Sr D N A a n d5 ．8 Sr D N A w i t hs t r a i n si ng e n u s o fS t a c h y b o t r y sw e T e9 9 ％a n d1 0 0 ％r e s p e c t i v e l y ．B yo b s e r v i n gt h

8、 em o r p h o l o g i c a l c h a r a c t e r ss u c ha s f i l a m e n t o u sf o r ma n d c o n i d i a I f r u c t i f i c a t i o n ．t h es t r a i nX 2 0 - 2b e l o n g s t oS t a c h y b o t r y ss p ．T h et o x i

9、ct e s t si n d i c a t e dt h a t t h e r eW a s n o t o x i np r o d u c e d i nt h e c u l t u r es o l u t i o no f X 2 0 - 2 ．O n e - f a c t - a t - a - t i m eW a s u s e d t oo p t i m i z e t h ef e r m e n t a

10、t i o nc o n d i t i o n so fp g l u c o s i d a s ep r o d u c t i o n ．T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h eb r a ni st h em o s t s u i t a b l ec a r b o nc o u p ea n d t h eO - g l u c o s i d a s ea c t i v i

11、t yi nc u l t u r es o l u t i o ni n c r e a s e d9 0 ％a R e ro p t i m i z i n gt h ep r o d u c i n ge n z y m e c o n d i t i o n s ．I tw a s f o u n dt h a tt h ec r u d ee n z y m e m a ys u r v i v ei nh i g hc o

12、n c e n t r a t i o no f g l u c o s ea n d i t s a c t i v i t yr e m a i n e d2 8 ％i n t h ep r e s e n c eo fl O g g l u c o s e p e rl i t e r ．T h e1 3 - g l u c o s i d a s ep r o d u c e db yX 2 0 - 2 W a sp u r i

13、 f i e dw i t hf o u rs t e p s ：a m m o n i u ms u l f a t ep r e c i p i t a t i o n ，D E A E - 5 2 c e l l u l o s e ，H i T r a p _ D E A E s e p h a r o s e a n d M o n o _ Q i o n - e x c h a n g e c h r o m a t o g

14、 r a p h y ．T h ep u r i f i e de n z y m e s h o w e d t h a ta s i n g l ep r o t e i n b a n d o nS D S - P A G E a n d i t s m o l e c u l a r m a s s w a s e s t i m a t e dt ob e 1 0 0 k D a ．T h e e n z y m e W a

15、s p u r i f i e d1 4 3 ．5 - f o l dt oh o m o g e n e i t ya n d t h es p e c i f i ca c t i v i t y r e a c h e d t o2 9 9 0 3 ．4 5u n i t s ／r a g ．n 坶。曲f n a lt e m p e r a t u r ea n dp Hf o r t h ee n z y m ea c t i

16、 v i t yw e r e6 0 “ Ca n dp H 5 ．6 ．T h e e n z y m e w 舔s t a b l e i nt h er a n g eo f p H 5 ．6 - 9 ．8 a n dw i t h i n6 0 “ ( 2 ．T h ee n z y m e w a si n h i b i t e db yA f ，C u ”．Z n ”a n d F e j + w i t h d i f

17、f e r e n t l e v e l ．T h e K m a n d Z m a x o f t h e e n z y m e f o rp - n i t r o p h e n y l 一8 - D - g l u c o p y r a n o s i d e ( p N P - G ) w e r e0 ．2 1 m M ，1 7 8 ．6W a a o l ’( m l ‘m i n ) “ ‘．a(chǎn) n d t h

18、e g l u c o s ea c t e da sc o m p e t i t i v ei n h i b i t o ro f p N P - G h y d r o l y s i sw i t h 艏v a l u e o f 1 ．5 4 m g ／m 1 ．T e n a m i n o a c i d r e s i d u e s i n t h e N - t e r m i n a l o f t h e e

19、n z y m e W a S d e t e r m i n e d t o b eN - S e r - T r p - P r o - L e u - A s p ·P h e - A l a - A s p - T r p ‘P r o ．K e y w o r d s ：S t a c h y b o t r y ss p ．C e l l u l a s e 爭(zhēng)g l u c o s i d a S e e n z