麻瘋樹jatrophacurcasl.胚乳cdna文庫的篩選分析及jcfbl1基因、jctctp1基因的克隆研究

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文題 目疊i 巡( 絲塹邊．幽s L ．) 胚乳e D N A 文庫的 ————————————————’。。。。。。。?！?。?！?。I _ - _ - _ _ _ - - _ _ _ - —- _ _ _ _ _ _ - —_ _ _ - L _ - _ =籃逸坌±至叢絲二魚! 』叁旦：生嬰墊圈鮑壺墮泣窒 ’。。?！?#183;·_ _ _ _ _ _ ?！?#183;··

2、_ - - - - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ；= ；_ _ _ 二．．_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ = _ _ _ - 二二二= ±= 二二—! —= —! ! ～’『／u作者 壹墊 完成日期! Q ! ! 主! 旦! ! 旦培養(yǎng)單位 望糾盤堂生全盤堂堂睦指導(dǎo)教師 盆童 副教授專業(yè)一． 植物堂研究方向 幽發(fā)直生物堂與生物技術(shù)授予學(xué)位日期 年 月 E 1四川人學(xué)頌七學(xué)位論文中文摘要以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的麻

3、瘋樹胚乳e D N A 文庫為基礎(chǔ)，隨機(jī)測序并經(jīng)麗處理和聚類拼接后獲得了4 7 個E S T 序列；在G e n e B a n k 中利用B l a s t x 、B l a s m 程序進(jìn)行了同源性比對，用計算機(jī)批量處理結(jié)合手工分類的方法對E S T 序列進(jìn)行了分類，按照功能分為1 0 組：新陳代謝( 1 0 ．6 4 ％) 、細(xì)胞防御( 8 ．5 1 ％) 、蛋白合成( 1 7 ．0 2 ％) 、能量( 6 ．3 8 ％) 、運(yùn)輸

4、( 4 ．2 6 ％) 、信號傳導(dǎo)( 8 ．5 1 ％) 、細(xì)胞生長分裂( 2 ．1 3 ％) 、轉(zhuǎn)錄因子( 4 ．2 6 ％) 、結(jié)構(gòu)蛋白( 4 ．2 6 ％) 和功能未知( 3 4 ．0 4 ％) 。在4 7 條E S T 序列中，發(fā)現(xiàn)一條與多種植物、動物F ．盒家族( F - b o x ) 相似的序列，隨后從文庫中獲得了含有完整編碼框的c D N A 序列，并利用P C R 方法獲得基因組序列( J c i F b l l )

5、。得到的J c - F b l l e D N A 長1 6 7 2 b p ，開放閱讀框?yàn)? 2 2 4 b p ，編碼的蛋白質(zhì)含有4 0 7 個氨基酸殘基( G e n B a r t k 登錄號為D Q 9 0 0 5 9 5 ) 。如．硒，，推導(dǎo)的氨基酸序列與擬南芥、水稻中的同源蛋白相似性分別為5 2 ％和7 5 ％；與人、斑馬魚、線蟲等動物的F ．b o x 蛋白的相似性達(dá)到4 8 ％～5 6 ％。應(yīng)用P f a m S e

6、a r c h 尋找功能結(jié)構(gòu)域，發(fā)現(xiàn)其除了含有F ．盒家族類結(jié)構(gòu)域外，還有富含亮氨酸重復(fù)單位( 1 e u c i n e ．r i c h r e p e a t s ，L R R s ) 。比對J c ．F b l l 的基因組序列和c D N A 序列，發(fā)現(xiàn)J c —F b l l 有兩個長度分別為3 3 1 b p 和8 9 3 b p 的外顯子和一個長3 6 2 b p 的插入序列，符合內(nèi)含子的G T - A G 法則，認(rèn)為是

7、J c ．F b l l 的內(nèi)含子。水稻、擬南芥基因組中的同源序列也出現(xiàn)了這種兩個外顯子、一個內(nèi)含子的結(jié)構(gòu)，且內(nèi)含子位置較為保守。此外，為了進(jìn)一步研究麻瘋樹F ．b o x 蛋白的功能，構(gòu)建了同時含有乃．乃，J 完整開放閱讀框序列和綠色熒光蛋白標(biāo)簽的真核表達(dá)載體p B l l 2 1 - J c —F b l l ．G 即，并完成酶切鑒定，以期為進(jìn)一步研究此蛋白的功能及其在麻瘋樹胚乳發(fā)育中的作用奠定基礎(chǔ)。同時，從此e D N A 文庫中

8、還獲得了一條與多種植物翻譯控制腫瘤蛋白( t r a n s l a t i o n a lc o n t r o l l e dt u m o rp r o t e i n ，T C T P ) 序列相似的E S T 序列，隨后從文庫中獲得了含有完整編碼框的e D N A 序列，并利用P C R 方法獲得基因組序列( J c ．Z ．c 7 P J ) ( G e n B a n k 登錄號為E F 0 9 1 8 1 8 ) 。得到

9、的J c ．T C T P ，e D N A 長1 4 1 0 b p ，含有一個由5 0 7 個堿基組成的完整開放閱讀框，5 ’非翻譯區(qū)與3 ’非翻譯區(qū)分別有5 2 6 和3 7 7 個核苷酸。J c —T C T P l 編碼的推測蛋白產(chǎn)物由1 6 8 個氨基酸殘基組成，其氨基酸序列與橡膠樹( H e v e ab r a s i l i e n s i s ) T C T P 、油棕( E l a e i sg u i n e e