鼠內臟利什曼病治療和l.d.lack基因克隆表達及e.coli粘附因子研究

1、四川大學博士學位論文鼠內臟利什曼病治療和L.d.LACK基因克隆表達及E.coli粘附因子研究姓名：馬瑩申請學位級別：博士專業(yè)：病原生物學指導教師：胡孝素20040423窮的 發(fā) 展中國 家的內 臟 利 什曼 病的 治療而言， 具有十分重要的 現(xiàn)實 意義。此結果為進一步研究雙氫青篙素對人類內 臟利什曼病以及犬內 臟利什曼病的 療效莫定了 體內 實 驗基礎， 為內 臟利什曼病的治療和預防提供了 一條新的途徑。我國的內 臟利什曼 病根據(jù)地理

2、分布和傳染源不同可分為 平原型( 人源型) 、 山 丘型 ( 犬源型) 和荒漠型 ( 野生動物源型) 。 不同 類型的內 臟利什曼病在發(fā)病年齡、 治療效果、 是否易復發(fā)和有無保蟲宿主等方面均有差異。近年我國山 丘 疫區(qū)的內 臟利 什曼 病的 年發(fā)病數(shù)出 現(xiàn)回升， 防治 任務 仍十分艱巨。 近年發(fā)現(xiàn)的 利什曼原蟲活性蛋白 激酶 C受體同 源物( l e i s h m a n i ah o m o l o g u e o f r e

3、c e p t o r s f o r a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e C , L A C K ) 是 利什 曼 原 蟲的高度保守性蛋白， 是一個很有希望用于疫苗研究的侯選抗原。 本研究應用R T P C R 獲得我國 平原 疫區(qū)和荒漠疫區(qū)杜氏 利什曼原蟲分離株L A C K 基因 ， 測 序表 明 片 段 大 小 均 為9 4 2 b p ， 與G e n e B

4、 a n k 中 多 種 利 什 曼 原 蟲L A C K基因的 核昔酸序列一致性達9 7 %以 上; 與本課題組已 經(jīng)獲得的我國山 丘疫區(qū)分離株的 L A C K基因 核昔酸序列相比 較， 三者的一致性達 9 5 %以 上。根據(jù)核酸序列推導的 3 1 2個氨基酸序列，與 G e n e B a n k中利什曼原蟲L A C K蛋白 一致性達 9 7 %以 上， 我國 三個不同疫區(qū)分離株 L A C K蛋白的一致性達9 5 % 以 上

5、， 具 有高 度同 源性。 根據(jù)我國當 前內 臟利什曼 病主 要 在山 丘疫區(qū)流行的 特點， 將山 丘疫區(qū)分離株的 L A C K基因與真核表達載體p c D N A 3 . 1 ( + ) 定向 重組后 轉染C O S - 7 細 胞， 通過R T P C R 及免疫 熒光 檢 測L A C K基因在真核細胞中的表達。結果顯示轉染了 重組質粒的 C O S - 7 細胞，其 R T - P C R 及免疫熒光檢測均呈陽性反應，證實重組

6、質粒p e D N A 3 - L A C K 能 在C O S - 7 細 胞中 有 效 表 達L A C K蛋白 ， 這 是 國 內 首 次報道 L A C K基因在真核細胞中的表達，為我國內 臟利什曼病核酸疫苗的研究提供了 重要實驗依據(jù)。本 文的 最后 一部分 對 產(chǎn)志 賀毒素型大腸埃希菌( s h i g a t o x i g e n i c E . c o l i ,S T E C )的粘附 相關因子 作了 初步研究。