beckman moflo xdp超速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)操作規(guī)程docx

1、MolFlo XDP 流式細(xì)胞儀操作流程 流式細(xì)胞儀操作流程一、開機(jī)及光路調(diào)節(jié) 一、開機(jī)及光路調(diào)節(jié)1． 開機(jī)前打開空調(diào)，保持持室內(nèi)溫度 22℃左右2． 開機(jī)前確認(rèn)鞘液桶液體量，倒空廢液桶，將鞘液桶擰緊3． 打開 UPS4． 開主機(jī)電源，和 aXcess Control Panel5． 打開負(fù)壓泵，打開增壓和負(fù)壓閥，確認(rèn)鞘液壓力達(dá)到正常值6． 開激光、液流7． 調(diào)整液流，至最佳平穩(wěn)狀態(tài)8． 開啟電腦，打開 Summit 軟件，按需要設(shè)定光

2、路調(diào)節(jié)窗口9． 待激光開啟預(yù)熱半小時(shí)后，調(diào)節(jié)光斑，按需要調(diào)節(jié) 488nm、633nm（405nm）和 305nm激光通路的光斑10． 光斑調(diào)制最佳狀態(tài)后應(yīng)用多色微球調(diào)節(jié)光路，按每個(gè)通道所要求調(diào)整 CV 值至最佳狀態(tài)二、樣本制備推薦方法 二、樣本制備推薦方法1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段：? 目標(biāo)細(xì)胞的MARKER, 對(duì)應(yīng)的抗體和熒光選擇：了解需要檢測(cè)的目標(biāo)細(xì)胞的特異性標(biāo)記和對(duì)應(yīng)的抗體,選擇商品化的抗體(熒光標(biāo)記或未標(biāo)記,合適的熒光素或二抗)? 選擇合

3、適的熒光和抗體對(duì)照2、 樣本處理? 必須是單細(xì)胞懸液. 外周血和骨髓收集時(shí)加抗凝劑即可進(jìn)行染色,可溶解紅細(xì)胞或直接進(jìn)行檢測(cè)和分選。.? 培養(yǎng)細(xì)胞需要消化(推薦用混合蛋白酶消化,按照說明書濃度), 過濾和洗滌至少一次后才能染色.組織樣本必須通過研磨成單細(xì)胞并過濾后才能進(jìn)行染色.? 通常 100-300 目濾網(wǎng)(一次性, 不銹鋼或尼龍網(wǎng)都行) .3、熒光染色：? 按照 106 有效細(xì)胞與1ug 抗體進(jìn)行染色或按照抗體說明書推薦的量進(jìn)行。如果

4、商品化抗體指明實(shí)驗(yàn)次數(shù),也要對(duì)標(biāo)本的細(xì)胞濃度進(jìn)行計(jì)數(shù). 染色通常室溫30 分鐘或冰上1 小時(shí)即可完成,整個(gè)試管于4 度封閉過夜，使用前棄去，加入1-2 ml 培養(yǎng)液待用? 收集結(jié)束后，立即離心樣本管內(nèi)細(xì)胞（300g，3-5 分鐘），棄上清，加入溫（37 度）培養(yǎng)液立即? 放置于適合的培養(yǎng)條件? 目的：能減少收集管壁對(duì)細(xì)胞的非特異性吸附，提高實(shí)際產(chǎn)量和細(xì)胞活性2.2、分選? 分選前管道消毒? 選擇分選收集模式? 選擇液滴偏向角度? 確定

5、Drop Delay? 標(biāo)本上機(jī)，標(biāo)本按上述要求準(zhǔn)備? 放置合適的收集器門、獲取數(shù)據(jù)，進(jìn)行分選五、清潔和保養(yǎng) 五、清潔和保養(yǎng)1、每日檢測(cè)或分選結(jié)束后需對(duì)儀器進(jìn)行清潔維護(hù)2、先用無菌雙蒸餾水上機(jī)，清洗 10 分鐘3、再用專用清洗液清洗 10min4、最后用無菌雙蒸餾水再清洗 30min5、將噴嘴取下，在超聲儀中進(jìn)行清洗 15min六、關(guān)機(jī) 六、關(guān)機(jī)1、清洗結(jié)束后關(guān)閉液流和激光2、關(guān)閉增壓和負(fù)壓閥3、關(guān)閉負(fù)壓和正壓泵4、打開鞘液桶閥門，壓力