人乳鐵蛋白基因在胡蘿卜(daucuscarotal.)中的表達(dá)及其功能研究

1、福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文人乳鐵蛋白基因在胡蘿卜（Daucus carota L.）中的表達(dá)及其功能研究姓名：鄭回勇申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：鄭金貴2002.8.1一套高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系，結(jié)果為：最適轉(zhuǎn)化受體為新鮮下胚軸及經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的下胚軸；共培養(yǎng)時(shí)，低濃度的乙酰丁香酮( 2 5 u M )對轉(zhuǎn)化具有促進(jìn)作用：適宜的卡那霉素篩選濃度是1 0 0 m g ／L 。篩選時(shí)，卡那霉素濃度先低后高，植株再生時(shí)完全去除，有利于縮短

2、植株再生周期。3 ．入乳鐵蛋白基因在胡蘿p 中的轉(zhuǎn)化及分子檢測以p B I l 2 1 為中間載體，把人乳鐵蛋白基因替換N G U S 位置上，構(gòu)建成表達(dá)載體p B I h L F 。在農(nóng)桿菌L B A 4 4 0 4 介導(dǎo)下，把目的基因?qū)牒}h ，獲得了外表正常的抗性植株。P C R 檢測、S o u t h e r n 雜交證實(shí)了外源基因己整合到抗性植株基因組D N A 中。對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行R T ，P C R 檢驗(yàn)，得到了陽性結(jié)

3、果，說明外源基因在胡蘿h 中能正常轉(zhuǎn)錄。4 ．轉(zhuǎn)基因植株抗菌能力加強(qiáng)，鐵含量得到提高提取轉(zhuǎn)基因植株葉片粗蛋白，以大腸桿菌D H 5n 和酵母菌A H l 0 9 為試驗(yàn)靶標(biāo)，測定了轉(zhuǎn)基因植株粗蛋白的抑菌活性。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株葉片相蛋白對D H S ；Ⅱ有強(qiáng)烈的抑制作用( 當(dāng)培養(yǎng)基中粗蛋白為l m g ／m l 時(shí)，每m 1 菌數(shù)為對照的1 ．4 7 ％) ，對A H l 0 9 的抑制作用較弱。按G B ／T1 3 8 8 3 —9