松弛素和白藜蘆醇在體外高糖環(huán)境誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討松弛素和白藜蘆醇對(duì)高糖誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞肥大的影響及其可能分子機(jī)制。
　　方法：⑴將H9C2心肌細(xì)胞分為正常糖濃度對(duì)照組（NG組）、高糖組（HG組）、松弛素組（HG+RLX組）、松弛素+Notch1拮抗劑組（HG+RLX+DAPT組）。用 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞存活率，AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽檢測(cè)細(xì)胞表面積，DCFH-DA熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平，比色法檢

2、測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Notch1、hes1、ANP、BNP基因表達(dá)情況，Western blot檢測(cè)Notch1、hes1、ANP、BNP、MnSOD、cytochrome c和caspase3蛋白表達(dá)情況。⑵將H9C2心肌細(xì)胞分為正常糖濃度組（NG組）、高糖組（HG組）、白蘆藜醇組（HG+Res組）和白藜蘆醇+DAPT組（HG+Res+DAPT組）。用鬼筆環(huán)肽檢測(cè)細(xì)胞表面積

3、, DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧簇（ROS）水平,比色法檢測(cè)SOD、MDA水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)Notch1、hes1、ANP、BNP mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①CCK8和AnnexinV/PI染色結(jié)果顯示，與NG組相比，HG組細(xì)胞存活率降低，凋亡率升高，而RLX干預(yù)后可顯著降低凋亡率，并呈濃度和時(shí)間依賴性增加細(xì)胞存活率。細(xì)胞表面積結(jié)果顯示，與NG組相比，HG組心肌細(xì)胞表面積增大，而RL

4、X干預(yù)后心肌肥大得到明顯改善。酶學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與NG組相比，HG組細(xì)胞ROS和MDA含量顯著升高，SOD活性顯著降低，而RLX干預(yù)后可增加SOD活性，降低ROS和MDA含量。qRT-PCR及Western blot結(jié)果顯示，與NG組相比，HG組Notch1、hes1和MnSOD表達(dá)下降，ANP、BNP、cytochrome c和caspase3表達(dá)增加，RLX干預(yù)后可逆轉(zhuǎn)上訴效應(yīng)，但上述保護(hù)作用可被Notch1拮抗劑消除。②與NG組相

5、比，HG可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，ROS和MDA含量增加，SOD活性下降，伴隨ANP和BNP基因及蛋白表達(dá)增加，Notch1和hes1表達(dá)下降，白藜蘆醇處理后可逆轉(zhuǎn)心肌細(xì)胞肥大，減輕ROS和MDA氧化損傷，增加SOD活性，抑制ANP和BNP表達(dá)，增加Notch1及hes1表達(dá)。
　　結(jié)論：松弛素可能通過活化Notch1信號(hào)通路保護(hù)高糖誘導(dǎo)的心肌肥大和凋亡，且可能與減少氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。此外，白藜蘆醇可能也通過改善氧化應(yīng)激，活化Notch