高效液相色譜-質(zhì)譜法在中藥的應(yīng)用研究

1、高效液相色譜 高效液相色譜-質(zhì)譜法在中藥的應(yīng)用研究 質(zhì)譜法在中藥的應(yīng)用研究摘要： 摘要：液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將液相色譜(HPLC)的高分離效能與質(zhì)譜(MS)的強(qiáng)大結(jié)構(gòu)鑒定功能結(jié)合起來(lái)，逐漸成為中藥現(xiàn)代化研究的強(qiáng)有力手段。本文對(duì)我國(guó)科學(xué)工作者應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥化學(xué)成分分析、中藥質(zhì)量控制、中藥體內(nèi)代謝、藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)、中藥材指紋圖譜及在復(fù)方中成藥分析的方面進(jìn)行的研究工作作一綜述。關(guān)鍵字： 關(guān)鍵字：HPLC-MS 質(zhì)量控制 藥代動(dòng)力學(xué) 藥效

2、學(xué) 指紋圖譜 中成藥分析HPLC是目前分離復(fù)雜體系最為有效的分析工具，由于其儀器自動(dòng)化、普及化程度愈來(lái)愈高，已成為中藥分析最常用的儀器之一。但目前中藥分析中運(yùn)用的HPLC儀器絕大多數(shù)與UV或DAD檢測(cè)器相聯(lián)接，對(duì)于單個(gè)色譜峰僅能提供保留時(shí)間及紫外圖譜等信號(hào)，而對(duì)未知成分所能提供的結(jié)構(gòu)信息相當(dāng)有限，對(duì)中藥等復(fù)雜體系的定性結(jié)果可能給出錯(cuò)誤的結(jié)論[1]。MS是一種高靈敏度的檢測(cè)器，且不同化合物的特征性強(qiáng)，可用于部分解析未知化合物的結(jié)構(gòu)。中草藥

3、是一個(gè)非常復(fù)雜的化學(xué)體系，其中含有大量的次生代謝產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，性質(zhì)相似，有的化合物還不穩(wěn)定。HPLC-MS將HPLC的高分離效能與MS的強(qiáng)大結(jié)構(gòu)測(cè)定功能組合起來(lái)，為中藥化學(xué)成分的快速分析提供了一個(gè)重要的新技術(shù)。一、中藥化學(xué)成分研究 一、中藥化學(xué)成分研究中藥化學(xué)成分是其發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，它的深入研究是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵和核心。以往中藥成分研究主要采用傳統(tǒng)提取分離方法，從復(fù)雜體系中分離提取單一化學(xué)物質(zhì)，再通過(guò)光譜和質(zhì)譜等分析技術(shù)進(jìn)行

4、鑒定。 而且對(duì)環(huán)境極不友好。HPLC-MS在使化學(xué)成分達(dá)到有效分離的基礎(chǔ)上，提供豐富的化合物結(jié)構(gòu)信息，在中藥化學(xué)成分分析中發(fā)揮了重要作用。中藥中某些常見(jiàn)的化學(xué)成分已經(jīng)有對(duì)照品，通過(guò)與對(duì)照品的色譜和質(zhì)譜特征進(jìn)行對(duì)照可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行鑒定。劉瑞等[2]采用HPLC-MS2鑒定大青葉水提液中的5種化學(xué)成分，通過(guò)與對(duì)照品的保留時(shí)間、色譜增益、紫外光譜圖和特征離子碎片進(jìn)行比較，鑒定出大青葉水提液圖譜中的5個(gè)色譜峰分別為胞苷、尿苷、鳥(niǎo)苷

5、、黃嘌呤和次黃嘌呤。劉進(jìn)懷等[3]建立了分析中藥三七的HPLC-UV-MS方法。通過(guò)與對(duì)照品比較，鑒定了14個(gè)成分；根據(jù)正負(fù)離子質(zhì)譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)，推斷出了41個(gè)化合物結(jié)構(gòu)。其中，野三七皂苷-H、野三七皂苷-E、竹節(jié)參皂苷L5、丙二酰基人參皂苷-Rgl、以及三七皂苷-J、-A、-R1、-HPLC-MS可靈敏準(zhǔn)確地測(cè)定中藥中含量低的活性或毒性成分。烏頭類生物堿即是烏頭中的有效成分又是有毒成分，王兆基等[9]用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式測(cè)定樣本中烏頭堿

6、、次烏頭堿、中烏頭堿含量，方法適于樣品中含有微量烏頭類生物堿或其基質(zhì)較為復(fù)雜的情況。Yue Song[10]建立了毛細(xì)管HPLC-ESI-MS法測(cè)定忍冬屬植物花蕾中所含的環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)，方法具有良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為1.9ng/mL。應(yīng)用該法首次成功的測(cè)定了植物中所含環(huán)烯醚萜苷的含量，為金銀花等藥材的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。三、中藥代謝與藥代動(dòng)力學(xué)研究 三、中藥代謝與藥代動(dòng)力學(xué)研究藥物代謝是指藥物在機(jī)體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程。藥物進(jìn)入體內(nèi)

7、后，多數(shù)經(jīng)過(guò)代謝轉(zhuǎn)化失活或降低了活性。也有的藥物經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化生成了藥理活性更強(qiáng)的代謝物。還有一些藥物經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化會(huì)產(chǎn)生毒性中間體或代謝物。因此，了解中藥復(fù)雜體系的代謝過(guò)程和途徑，對(duì)于闡明中藥藥理作用的機(jī)理，了解中藥的毒副作用具有重要意義。中藥體內(nèi)代謝和藥代動(dòng)力學(xué)研究的挑戰(zhàn)在于缺乏對(duì)進(jìn)入體內(nèi)的所有微量組分和微量的代謝產(chǎn)物的足夠靈敏的分析方法，而HPLC-MS在一定程度上為其提供了契機(jī)。LC-MS在藥物代謝研究中除了可確定分子量外，還可以根據(jù)分

8、子特異性斷裂規(guī)律推導(dǎo)出重要部分結(jié)構(gòu)甚至是完整的結(jié)構(gòu)，其依據(jù)是由于多數(shù)藥物的代謝物保留了原形藥物分子的骨架結(jié)構(gòu)。代謝物可能與母體藥物具有相似的裂解規(guī)律，即丟失一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征離子，因此利用LC-MS可以迅速找到可能的代謝產(chǎn)物，并鑒定出結(jié)構(gòu)[11]。Peng Li等[12]使用大鼠肝微粒體與丹參酮ⅡA共同培養(yǎng)，用HPLC-MSn鑒別了大鼠肝代謝物中的丹參酮ⅡA及其代謝產(chǎn)物。采用電噴霧離子源，正離子掃描，通過(guò)與對(duì)照品對(duì)比

9、色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜碎片峰，成功地鑒別出丹參酮ⅡA的三種羥基代謝物丹參酮ⅡB、紫丹參甲素A和羥基丹參酯ⅡA，并推測(cè)出它們與丹參酮ⅡA和總丹參酮藥理活性相同。陳勇等[13]采用LC-ESI-IT-MSn研究了大鼠腹腔肌注氧化苦參堿后尿液中的代謝產(chǎn)物，在大鼠尿樣中發(fā)現(xiàn)6種I相氧化還原代謝產(chǎn)物，主要代謝物是苦參堿，未發(fā)現(xiàn)Ⅱ相代謝物。HPLC-MSn和HPLC-TOF-MS聯(lián)用。從多個(gè)角度提供信息，增加了定性的準(zhǔn)確性。龐麗瓊等[14]建立大鼠血清