腺病毒質量檢定方法

1、1一、無菌檢查............................................................................................................................2（一）薄膜過濾法................................................................................

2、............................3（二）直接接種法............................................................................................................3二、支原體檢查...................................................................

3、.....................................................4第一法 細胞培養(yǎng)法..........................................................................................................4第二法 指示細胞培養(yǎng)法（DNA 染色法）..............................

4、......................................5三、細胞內、外源病毒因子檢查............................................................................................71 細胞形態(tài)觀察及紅細胞吸附試驗（簡稱血吸附試驗）............................................72 不同

5、細胞傳代培養(yǎng)法檢測病毒因子............................................................................73 接種動物和雞胚法檢測病毒因子................................................................................84 逆轉錄病毒及其他內源性病毒或病毒核酸的檢測..........

6、..........................................81）逆轉錄酶活性測定......................................................................................................82）透射電鏡檢查........................................................

7、....................................................113）感染性試驗................................................................................................................115 特殊外源病毒因子的檢測................................

8、..........................................................11四、致瘤性檢查......................................................................................................................11五、感染效率和病毒的產量等的測定.................

9、.................................................................12六、細胞鑒別（染色體檢查）..............................................................................................12七、病毒敏感性檢查...................................

10、...........................................................................13八、細胞功能檢查..................................................................................................................13九、重組腺病毒滴度的測定.......

11、...........................................................................................14十、病毒比滴度（比活性 IU）測定 ....................................................................................16十一、E1A 區(qū)、E2B 區(qū)、AAV 及插入基

12、因的檢測 ...........................................................16一）E1A 區(qū)的檢測 .........................................................................................................16二）E2B 區(qū)的檢測 .........................

13、................................................................................17三）AAV 的檢測............................................................................................................18四）插入基因的檢測..........

14、............................................................................................18十二、病毒外源因子檢查......................................................................................................19十三、內毒素測定...

15、...............................................................................................................19供試品溶液的制備...................................................................................................

16、.......19確定最大有效稀釋倍數（MVD） ................................................................................20方法 1 凝膠法........................................................................................................

17、.......20鱟試劑靈敏度復核試驗..................................................................................................21干擾試驗.................................................................................................

18、.........................21檢查法..............................................................................................................................23十四 效力試驗插入基因表達活性測定，插入基因的生物學活性測定............................24十五

19、 復制型病毒（RCA）檢測 A549 細胞檢測法 ...........................................................24十六 腺相關病毒的檢測采用 PCR 法..................................................................................26十七 殘留量測定應根據生產工藝及成品的添加成份，對有潛在危險性

20、的成份進行殘留量檢測：..................................................................................................................................271 殘余宿主 DNA 含量測定..............................................................

21、..............................272 殘余牛血清白蛋白含量測定.......................................................................................273 殘余核酸酶含量測定..........................................................................

22、.........................28十八 重組病毒制品的穩(wěn)定性試驗........................................................................................2836、封閉式薄膜過濾器，濾膜孔徑應不大于 0.45um，直徑約為 50mm。根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。② 試驗步驟 試驗步驟（一）薄膜過濾法 （一）薄膜過濾法：1、

23、將少量的沖洗液過濾，以潤濕濾膜。2、取規(guī)定量，每支（瓶）供試品裝量為 5ml 或以下者，全部轉移至含適宜稀釋液 100ml 的無菌容器內，混勻，立即過濾；每支（瓶）供試品裝量為 5ml 以上者直接過濾。或全部轉移至含適宜稀釋液的無菌容器內，混勻，立即過濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數一般不少于3 次，沖洗量 100ml、總沖洗量不超過 1000ml。沖洗后，2 個濾器中加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基各 100m

24、l，另一濾器中加入改良馬丁培養(yǎng)基 100ml。3、細菌置 30-35℃、真菌置 20-25℃培養(yǎng) 14 天，培養(yǎng)期間逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現渾濁，培養(yǎng) 14 天后，不能從外觀上判斷有無菌生長，可取該培養(yǎng)基適量轉接種同種新鮮培養(yǎng)基中及營養(yǎng)瓊脂斜面和改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，細菌培養(yǎng) 2 天，真菌培養(yǎng) 3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基中及營養(yǎng)瓊脂和改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上是否有菌生長；或取培養(yǎng)液（

25、物）涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌，必要時做菌種鑒定。（二）直接接種法 （二）直接接種法：1、取規(guī)定量供試品，等量分別接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基中（2 種培養(yǎng)基的接種支數或瓶數之比為 2:1） 。除有規(guī)定外，每個容器中培養(yǎng)基的用量應符合接種的供試品體積，不得大于培養(yǎng)基體積的 10%，同時硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于 15ml，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。2、將上述接種后的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基平均分成兩份，