酵母細(xì)胞壁(1→3)-β-D-葡聚糖衍生物的制備及抗氧化活性研究.pdf

1、釀酒酵母S.cerevisiae是安全無毒的微生物，其中細(xì)胞壁多糖具有免疫刺激作用、抗腫瘤和抗氧化等生物活性。酵母細(xì)胞壁中存在堿不溶性(1→3)-β-D-葡聚糖，由于其不溶于水，呈劇集顆粒狀，稍溶于二甲基亞砜，當(dāng)然升溫能加快其溶解速度和提升溶解度，這嚴(yán)重制約了它的應(yīng)用價(jià)值。酵母(1→3)-β-D-葡聚糖（PJ）是用酸堿法從酵母細(xì)胞壁中提取的堿不溶性的葡聚糖。通過衍生化該多糖得到硫酸化葡聚糖（S-PJ）、羧甲基化葡聚糖(CM-PJ)、磷酸

2、化葡聚糖(P-PJ)、羧甲基硫酸化葡聚糖(CS-PJ)、羧甲基磷酸化葡聚糖(CP-PJ)和硫酸磷酸化葡聚糖(SP-PJ)等六種多糖衍生物。測(cè)定了葡聚糖及其衍生物的粘度和數(shù)均分子量，用紅外光譜、核磁和紫外等方法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。通過測(cè)定六種多糖衍生物的還原能力、清除羥基自由基的能力、超氧陰離子清除能力和抗脂質(zhì)過氧化等性質(zhì)來研究其抗氧化活性。
　　本文的主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)論如下：
　　1、用酸堿法從酵母細(xì)胞壁中提取到了堿不溶性的

3、酵母(1→3)-β-D-葡聚糖（PJ），即酵母細(xì)胞壁先在90℃用堿處理，再用蒸餾水洗滌離心，得到的沉淀用醋酸處理之后得到產(chǎn)品。該樣品在紅外光譜圖中沒有發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的特征吸收峰，樣品的純度有很大的提高，為93％左右；
　　2、制備了硫酸化（S-PJ）、羧甲基化(CM-PJ)、磷酸化(P-PJ)、羧甲基磷酸化(CP-PJ)、羧甲基硫酸化(CS-PJ)和硫酸磷酸化(SP-PJ)）等多種多糖衍生物；研究和分析了該葡聚糖和各個(gè)衍生物的粘

4、度和水溶性，用核磁、紅外和紫外光譜等分析了其結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明衍生化能有效提高葡聚糖的溶解性，但分子量及其粘度也有所降低。紫外光譜圖表明葡聚糖和衍生物中蛋白質(zhì)的含量很低，紅外和核磁譜圖更加佐證了產(chǎn)品的成功合成；
　　3、研究了化學(xué)修飾后PJ的體外抗氧化作用。①多糖衍生物的總還原能力測(cè)定結(jié)果表明：六種β-葡聚糖衍生物都有還原能力，隨著濃度的升高，(1→3)-β-D-葡聚糖衍生物的還原能力均呈現(xiàn)增強(qiáng)趨勢(shì)，其中P-PJ等幾種衍生物的還原能力

5、較接近，雖然S-PJ濃度在3.2 mg/mL時(shí)的還原能力只有VC的40%，但也要比其它衍生物的還原能力強(qiáng)。六種β-葡聚糖衍生物清除超氧陰離子（O2-·)的結(jié)果表明：在所測(cè)的濃度范圍內(nèi)，β-葡聚糖衍生物P-PJ等表現(xiàn)出相當(dāng)強(qiáng)的清除能力，它的EC50大約在1.2mg/mL，但是它的清除能力與陽(yáng)性對(duì)照VC相比稍微弱些。而CM-PJ和SP-PJ這兩種衍生物的EC50在3.2mg/mL左右。多糖對(duì)羥基自由基（·OH）的清除結(jié)果表明：在濃度為3.2

6、mg/mL時(shí)，多糖衍生物P-PJ、S-PJ、CM-PJ、CP-PJ、CS-PJ和SP-PJ清除羥自由基活性分別為67.59%、38.45%、52.45%、34.89%、39.20%和48.89%。P-PJ對(duì)羥自由基清除能力明顯高于其它衍生物，而其它衍生物的清除能力在高濃度的條件下也具有良好的清除能力。④多糖衍生物對(duì)誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的抑制作用結(jié)果表明：三種多糖衍生物對(duì)誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)都具有一定的抑制作用。化學(xué)修飾后的多糖的抗氧化能力