以跨膜蛋白疏水結(jié)構(gòu)域為多肽標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白酶定位研究.pdf

1、蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)推動了對基因工程、分子生物學(xué)、免疫學(xué)和疾病診斷學(xué)等許多新興學(xué)科的發(fā)展。隨著生命科學(xué)和生物技術(shù)的不斷進(jìn)步，對于生物大分子分離和純化的要求也越來越高。蛋白質(zhì)常存在于復(fù)雜的混合體系中，對溫度、pH、機(jī)械剪切力、酶等均非常敏感，穩(wěn)定性較差，易于變性，故用于小分子的分離技術(shù)大多并不能直接用來分離蛋白質(zhì)。
　　 本研究對通過整合蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域與材料表面的疏水相互作用達(dá)到蛋白分離問題進(jìn)行了探討。整合蛋白約占各種生物體總蛋白

2、的四分之一以上，這些整合蛋白牢牢嵌入到了脂質(zhì)膜中，對于保持蛋白的疏水結(jié)構(gòu)及其功能是必不可少的。到目前為止，大多數(shù)的整合蛋白的應(yīng)用都與它們的生理作用有關(guān)。然而，事實上整合蛋白的疏水結(jié)構(gòu)也可以進(jìn)行多功能方面的研究。在本研究中主要選用若干種整合蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域以及全蛋白如枯草芽孢桿菌Mrp操縱子系統(tǒng)中的MrpD和MrpF兩種蛋白作為疏水蛋白標(biāo)記結(jié)合到目標(biāo)蛋白如綠色熒光蛋白(GFP)，大腸桿菌酸性磷酸酶(EcAP)或堿性磷酸酶(PhoA)，麥芽

3、糖結(jié)合蛋白(MBP)等的末端。經(jīng)研究結(jié)果表明，大多數(shù)整合蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域作為疏水標(biāo)記可以起到將目標(biāo)蛋白錨定在生物體體細(xì)胞膜上的作用。在此基礎(chǔ)上，研究了帶有該疏水標(biāo)記的重組目標(biāo)蛋白與材料表面的相互作用。一方面選用大腸桿菌酸性磷酸酶(EcAP)和大腸桿菌堿性磷酸酶(PhoA)作為目標(biāo)蛋白模型，選用枯草芽孢桿菌MrpD全蛋白和MrpF的跨膜結(jié)構(gòu)域作為疏水蛋白標(biāo)記構(gòu)建融合蛋白。另一方面，選用以MPEG(750)-SH改性后金片表面作為相互作用的