蓮藕采后主要腐敗菌的分離鑒定及空氣放電對(duì)其抑菌機(jī)理的研究.pdf

1、空氣放電主要應(yīng)用在果蔬保鮮上，通過(guò)抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖降低果蔬的腐敗率，然而對(duì)空氣放電抑菌機(jī)理的研究卻不甚明了。本課題對(duì)模擬冷鏈運(yùn)輸蓮藕上的腐敗菌進(jìn)行分離純化、鑒定并以采后蓮藕上的主要腐敗菌之一尖孢鐮刀菌為研究對(duì)象，從菌絲、孢子的生長(zhǎng)及其超微結(jié)構(gòu)的變化、細(xì)胞表面電荷的變化、細(xì)胞壁中幾丁質(zhì)和殼聚糖的變化、細(xì)胞膜中脂肪酸的變化、降解植物細(xì)胞壁酶活性變化等方面來(lái)研究空氣放電對(duì)尖孢鐮刀菌的抑菌機(jī)理。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)對(duì)模擬冷鏈

2、運(yùn)輸上的采后蓮藕腐敗菌進(jìn)行分離純化，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）和茄病鐮刀菌(Fusarium solani)為采后蓮藕主要腐敗菌。
　　(2)空氣放電對(duì)尖孢鐮刀菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)都有顯著的抑制作用，且抑菌效果與處理時(shí)間與呈正相關(guān)，處理時(shí)間越長(zhǎng)，菌絲的生長(zhǎng)速度越慢，孢子的萌發(fā)率越低;通過(guò)掃描電鏡和透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)空氣放電處理后的菌絲體干癟褶皺且表面粗糙，外層結(jié)構(gòu)不完整，對(duì)照組

3、菌絲光滑，粗細(xì)均勻一致，無(wú)褶皺，同時(shí)空氣放電處理后的菌絲細(xì)胞和孢子細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞壁內(nèi)陷或者突起，細(xì)胞壁厚薄不均勻，細(xì)胞內(nèi)線粒體較對(duì)照組顯著減少，出現(xiàn)大量液泡且液泡體積較大，細(xì)胞質(zhì)失去緊致結(jié)構(gòu)，對(duì)照組孢子細(xì)胞形態(tài)正常，呈橢圓形，細(xì)胞壁厚薄均勻，細(xì)胞質(zhì)較為緊致;利用AO/EB熒光染料標(biāo)記孢子細(xì)胞，得到空氣放電處理后的孢子細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，且臭氧和負(fù)離子（ozone+NAI）處理后的孢子凋亡率顯著高于臭氧(ozone)和負(fù)離子(NAI)單獨(dú)

4、作用。
　　(3)利用zeta電位儀測(cè)定孢子細(xì)胞表面電勢(shì)，得到孢子細(xì)胞表面電勢(shì)為負(fù)值，即孢子細(xì)胞表面負(fù)電荷占優(yōu)勢(shì)，空氣放電處理后zeta電勢(shì)增加，ozone+NAI處理組孢子細(xì)胞表面的負(fù)電荷最少，其次是ozone處理和NAI處理組。結(jié)合激光共聚焦技術(shù)，將表面帶正電荷的CdSe/ZnS殼核式量子點(diǎn)標(biāo)記細(xì)胞表面電荷，未處理組孢子細(xì)胞表面負(fù)電荷標(biāo)記的量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度整體較強(qiáng)，表面負(fù)電荷分布均勻，空氣放電處理組量子點(diǎn)分布不均勻，熒光強(qiáng)度整體

5、較弱，局部化分布明顯。
　　(4)結(jié)合分光光度法、紅外分析法、X-射線衍射法、元素分析法得到，空氣放電處理后細(xì)胞壁通透性增大，幾丁質(zhì)酶活升高，且ozone+NAI處理組顯著高于ozone和NAI單獨(dú)處理組;通過(guò)掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組幾丁質(zhì)分子結(jié)構(gòu)緊實(shí)，呈片狀或塊狀堆積，表面形態(tài)光滑，無(wú)明顯的塊狀分散顆粒，空氣放電處理后的幾丁質(zhì)分子結(jié)構(gòu)松散，有大量的碎屑顆粒分子存在，對(duì)照組殼聚糖分子顆粒呈明顯的塊狀分布，表面較為粗糙，有許多碎屑顆粒

6、分子附著在塊狀顆粒表面，空氣放電處理后的殼聚糖分子顆粒更為分散，無(wú)大型塊狀顆粒分子存在，表面更加粗糙;紅外分析后發(fā)現(xiàn)空氣放電對(duì)幾丁質(zhì)和殼聚糖官能團(tuán)位置無(wú)顯著影響，但增加了殼聚糖的脫乙酰度;空氣放電處理后幾丁質(zhì)的結(jié)晶度較未處理組顯著增高，殼聚糖的結(jié)晶度降低;幾丁質(zhì)和殼聚糖的C/N比率降低，其中ozone+NAI處理組C/N比率最小，其次為NAI和ozone單獨(dú)處理組，未處理組C/N比率顯著高于處理組。
　　(5)采用分光光度法得到空

7、氣放電顯著提高了細(xì)胞膜通透性;未處理組麥角固醇含量顯著高于空氣放電處理組，其中ozone、NAI單獨(dú)處理組麥角固醇含量顯著高于ozone+NAI處理組;采用氣相色譜對(duì)細(xì)胞膜脂肪酸進(jìn)行分析，得到飽和脂肪酸:空氣放電處理組肉豆蔻酸、十五烷酸、花生酸、山崳酸、二十三烷酸、木蠟酸含量增加，棕櫚酸、二十一烷酸含量減少; ozone處理組珍珠酸含量增加，NAI和ozone+NAI處理組珍珠酸含量減少;硬脂酸含量無(wú)顯著變化。不飽和脂肪酸:空氣放電處理

8、組棕櫚油酸、花生一烯酸、順芥子酸含量增加，亞油酸含量減少，油酸含量無(wú)顯著變化?？諝夥烹娞幚砗蟛伙柡椭舅崤c飽和脂肪酸比值與未處理組相比顯著降低，ozone+NAI處理組顯著低于ozone、NAI單獨(dú)處理組。
　　(6)空氣放電對(duì)尖孢鐮刀菌產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶活性有顯著的抑制效果，且ozone+NAI處理組較ozone和NAI單獨(dú)處理組抑制效果更為顯著。其中木聚糖酶活性與處理時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，隨著處理時(shí)間的增加酶活性逐漸降低，纖維素酶（羧