沙棘果中活性物質(zhì)的提取及其對心臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、沙棘(Hippopha?rhamnoides L.)為胡頹子科落葉灌木或喬木，其果實富含維生素、微量元素、黃酮、多酚、脂肪酸等多種生物活性成分，具有降膽固醇、降血壓、降血糖等生理功能。研究選用超聲波輔助溶劑法提取沙棘果中的活性物質(zhì)，以提取物得率、抗氧化能力為指標(biāo)，確定適宜的提取溶劑；通過單因素實驗進(jìn)一步確定純化的工藝參數(shù)。利用Langendorff離體心臟灌流技術(shù)，研究沙棘活性物質(zhì)對大鼠離體心臟缺血再灌注(I/R)損傷的保護(hù)作用，揭示了

2、沙棘活性物質(zhì)保護(hù)心肌缺血再灌注損傷(MIRI)的機(jī)制可能與自噬有關(guān)，為沙棘的開發(fā)和利用提供了理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。論文主要分為以下兩部分：
　　1.通過超聲波輔助提取法，以提取物得率、清除DPPH自由基和羥自由基的能力為指標(biāo)，對不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇、丙酮和水進(jìn)行比較，確定70％乙醇溶液為提取沙棘活性物質(zhì)的適宜提取劑，實驗發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)以多酚類為主。沙棘提取物的純化處理，以沙棘多酚為參照，通過單因素實驗確定純化的工藝參數(shù)：首先，對供試的5

3、種大孔樹脂進(jìn)行篩選，NKA-2型號大孔樹脂對沙棘多酚的靜態(tài)吸附和解吸均有較好的作用；其次，當(dāng)沙棘提取物的質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，上柱流速為1.0 mL/min時，NKA-2型大孔樹脂對沙棘多酚的吸附效果最佳；當(dāng)用60%乙醇為解吸劑，洗脫液體積為90 mL時，沙棘多酚的動態(tài)洗脫效果最優(yōu)。使用高效液相色譜儀(HPLC)定性分析純化后的提取物，結(jié)果顯示，純化后的沙棘提取物主要包括：沒食子酸、(+)-兒茶素、咖啡酸、綠原酸、槲皮素、根皮

4、苷、異鼠李素等。
　　2.利用Langendorff離體心臟灌流技術(shù)探究純化后的沙棘活性物質(zhì)對大鼠離體心臟I/R損傷的保護(hù)作用。通過監(jiān)測心率指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，停灌前十分鐘向大鼠的離體心臟注入含有沙棘提取物的灌流液后能明顯改善大鼠的心臟功能；理化指標(biāo)的檢測說明，沙棘提取物可以減輕心肌細(xì)胞的損傷程度，主要是通過降低冠脈流出液中心肌酶乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的漏出實現(xiàn)的；蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示，沙棘提取物抑制了Becl