基于對蝦過敏原致敏模型篩選抗過敏乳酸菌及其調(diào)控機理研究.pdf

1、對蝦等水產(chǎn)品食用蛋白的致敏性對食用者的安全健康存在著潛在的威脅，其致敏性的高低主要取決于食用蛋白中過敏原的種類及含量。很多研究表明，乳酸菌能夠有效減緩過敏癥狀，調(diào)節(jié)免疫平衡。然而，有許多問題尚待解決，例如抗過敏菌株的種類及其調(diào)控的機制等。鑒于此，本研究擬以具有較高經(jīng)濟價值的特色物種——南美白對蝦為對象，建立腹腔注射該蝦肌肉蛋白的Balb/c小鼠過敏模型，經(jīng)口灌胃5種乳酸菌，結合間接ELISA檢測小鼠血清中特異性IgE、IgG1抗體水平以

2、驗證過敏模型的成功建立。通過蘇木素-伊紅/甲苯胺藍染色以及流式細胞儀檢測細胞亞群分化等手段篩選最佳抗過敏乳酸菌，最后通過不同細胞與芽孢乳酸菌09.712的共培養(yǎng)，測定細胞因子、mRNA表達量等的變化，研究乳酸菌調(diào)控過敏反應的機制。本研究通過比較五種乳酸菌緩解蝦蛋白過敏的作用，為今后篩選具有抗過敏活性的乳酸菌提供依據(jù)，同時對于研究乳酸菌的抗過敏作用機制具有參考意義。主要研究結果如下:
　　1、采用腹腔注射致敏、經(jīng)口灌胃激發(fā)方法建立南

3、美白對蝦肌肉蛋白過敏的Balb/c小鼠動物模型。1.2 mg蝦蛋白劑量組小鼠血清中特異性IgE、IgG1抗體水平增加顯著且組胺含量明顯高于對照組，達到了664.08±6.52 ng/mL。小腸蘇木素-伊紅染色和甲苯胺藍染色切片的形態(tài)學觀察表明，1.2 mg劑量組小鼠小腸中出現(xiàn)炎癥和上皮結構的破壞，腸內(nèi)肥大細胞脫顆粒，出現(xiàn)了嚴重的腸道過敏反應，證明該過敏模型已成功建立，可用于后續(xù)實驗研究。
　　2、芽孢乳酸菌09.712有效緩解小鼠

4、過敏癥狀，改善腸道形態(tài)，抑制肥大細胞脫顆粒和降低特異性IgE、IgG1抗體水平。另外，流式測定小鼠脾淋巴細胞T細胞亞群數(shù)量結果表明，芽孢乳酸菌09.712促進Th0細胞向Th1細胞方向極化，糾正Th1/Th2比值以及增加Treg細胞數(shù)量，增加Th1型細胞因子分泌。上述結果表明，芽孢乳酸菌09.712對于過敏反應具有治療作用，可用于后續(xù)研究。
　　3、利用流式細胞儀分選Treg細胞、Th2細胞和B細胞，選取芽孢乳酸菌09.712作為

5、實驗菌株，采用體外實驗與上述細胞共培養(yǎng)，蝦肌肉蛋白體外刺激，ELISA法測定細胞因子含量和抗體分泌量，rt-PCR測定mRNA表達量。結果發(fā)現(xiàn)，芽孢乳酸菌09.712抑制IgE分泌，促進IgG4分泌，表明乳酸菌能夠促進抗體轉(zhuǎn)換。另外，芽孢乳酸菌09.712增強Foxp3、TGF-β以及IL-10 mRNA表達，降低Th2型細胞因子分泌，說明乳酸菌能夠抑制Th2型免疫應答，調(diào)控Th1/Th2之間的免疫平衡。體外P815肥大細胞和芽孢乳酸菌