β-淀粉樣蛋白寡聚體的制備及其表征.pdf

1、阿爾茨海默癥（Alzheimer Disease，AD）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，又名老年癡呆。它的病理學特征分別是淀粉樣蛋白斑和神經(jīng)纖維結(jié)。近些年來，隨著β-淀粉樣蛋白質(zhì)（β-amyloid,Aβ）假說的不斷更新，越來越多的實驗證據(jù)表明淀粉樣蛋白質(zhì)沉積只是AD致病的結(jié)果而不是導致其致病的關(guān)鍵因素，其寡聚體形式的淀粉樣蛋白才是致病的罪魁禍首。
　　為了從分子水平更深層次地理解淀粉樣蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集的分子機制，解析淀粉樣蛋白

2、質(zhì)寡聚體的分子結(jié)構(gòu)迫在眉睫。固體核磁共振技術(shù)是研究這類體系最有力的工具。但是，固體核磁共振技術(shù)解析蛋白結(jié)構(gòu)對樣品要求較高，需要大量的、均一性較好的樣品。因此在體外制備符合其要求的寡聚體樣品尤為重要。
　　本論文主要研究內(nèi)容包括以下三個部分：
　　（1）Aβ1-40蛋白的獲取
　　運用分子克隆、蛋白表達純化技術(shù)在大腸桿菌細胞中成功制備出高含量、高純度的Aβ1-40蛋白。
　?。?）Aβ1-40寡聚體樣品的制備、表征

3、
　　在溶液環(huán)境中采用低溫低鹽以及添加抑制劑、金屬離子等幾個方面制備Aβ1-40蛋白的寡聚體，并結(jié)合電泳、ThT熒光光譜、ANS熒光光譜、圓二色光譜和透射電子顯微鏡技術(shù)等對寡聚體進行初步表征。發(fā)現(xiàn)Aβ1-40寡聚體呈圓餅狀，直徑為15nm-35nm左右。
　?。?）抑制劑、金屬離子對Aβ1-40蛋白聚集機制的研究
　　在課題2的基礎上，通過液體核磁共振技術(shù)，研究了抑制劑、金屬離子與Aβ1-40蛋白相互作用的分子機制，進