綠竹及擬南芥SEP3蛋白原核表達(dá)、純化及寡聚體分析.pdf

1、竹類資源豐富，研究和開發(fā)利用的空間巨大。有關(guān)竹子開花生理過程的研究一定程度上受取樣困難和相關(guān)基因組信息缺乏的限制，因此研究竹子開花中的關(guān)鍵因子是非常必要的。植物體內(nèi)SEPALLATA3蛋白（簡稱SEP3）與其他蛋白或元件組裝成多聚體復(fù)合物，SEP3蛋白自身或與其它蛋白是如何組裝的，形成什么樣的空間復(fù)合物尚不清楚，但其在植物開花生長中具有非常重要的作用。
　　 本實驗構(gòu)建了綠竹和擬南芥SEP3蛋白的原核表達(dá)載體，純化可溶性SEP3

2、蛋白并進(jìn)行體外功能結(jié)構(gòu)試驗，探究SEP3蛋白結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系及多聚體的形成機(jī)制。主要結(jié)果如下:
　　 1.成功構(gòu)建得到不同結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)SEP3蛋白載體，以pET-15b為表達(dá)載體，Rosetta為宿主表達(dá)細(xì)菌，20℃條件下1％ IPTG誘導(dǎo)15h，純化得到了高純度的擬南芥和綠竹的M-domain SEP3蛋白、IK-domain SEP3蛋白和SEP3包涵體蛋白。
　　 2.通過基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜MALD

3、I-TOF-MS指紋圖譜分析，Mascot程序?qū)⒌玫降亩嚯钠闻cSwissProt數(shù)據(jù)庫信息比對，驗證原核表達(dá)蛋白為SEP3蛋白。
　　 3.SEP3蛋白N端具有與DNA特異性結(jié)合的M區(qū)，本實驗將純化得到的M-domain SEP3蛋白與啟動子特異序列CArG-box DNA結(jié)合，通過凝膠阻滯實驗驗證了SEP3蛋白具有結(jié)合DNA的活性。
　　 4.分析凝膠過濾層析峰圖顯示綠竹和擬南芥SEP3蛋白具有多聚性，體外戊二醛交聯(lián)