2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、建立靈敏、簡單、可用于血液中生物活性物質(zhì)測定的分析方法是臨床檢驗診斷學(xué)學(xué)科發(fā)展的重要方向之一。電化學(xué)分析法靈敏、快速,且所用儀器簡單、易于微型化,在臨床疾病的輔助診斷和標志物的快速檢測中扮演著重要角色。而液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有靈敏度高、結(jié)果準確且重現(xiàn)性好等優(yōu)點,可實現(xiàn)血液中已知和未知的多種代謝物同時檢測。鑒于此,本文以氧化/還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+/NADH)為基礎(chǔ),建立了簡單、實用的血液中乙醇和總膽汁酸(total b

2、ile acid,TBA)的電化學(xué)分析方法;并采用超高效液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜(UPLC-TripleTOF-MS/MS)技術(shù)對妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)和妊娠期無癥狀高膽汁酸血癥(asymptomatic hypercholanaemia of pregnancy,AHP)患者血清膽汁酸代謝輪廓進行全面分析。主要內(nèi)容包括以下四個部分:
  1.免

3、修飾絲網(wǎng)印刷碳電極(SPCE)-電化學(xué)測定血漿乙醇方法的建立及應(yīng)用。利用乙醇脫氫酶(ADH)和NAD+特異性催化乙醇生成乙醛和NADH的氧化-還原體系,采用SPCE并結(jié)合直接稀釋血液的策略,實現(xiàn)血漿中乙醇的電化學(xué)測定。血漿樣本經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋后與ADH和NAD+室溫共反應(yīng),再滴加到SPCE表面,采用示差脈沖伏安法(DPV)進行測定。該方法線性良好(0.10~3.20mg/mL,r=0.9943),靈敏度較高(LOD,40.0

4、μg/mL)。精密度和回收率分別為(RSD,5.1%~9.4%)和(80.1%~103%)。將建立的方法用于20例飲酒自愿者血漿乙醇的測定并與氣相色譜(GC)法測定結(jié)果比較,相關(guān)性良好(r=0.9311)。該方法簡單、準確,有望用于酒精中毒、酒駕和醉駕等的快速篩查。
  2.基于雙重氧化的血清TBA超靈敏電化學(xué)傳感器的構(gòu)建及臨床應(yīng)用。含3α羥基類固醇脫氫酶(3α-HSD)、NAD+和三聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy)32+)的PBS溶液滴

5、加到SPCE電極表面并施加恒電位,加入稀釋血樣,3α-HSD特異性催化血清中膽汁酸生成 NADH,NADH與被氧化的Ru(bpy)33+反應(yīng)生成Ru(bpy)32+,Ru(bpy)32+再被氧化為Ru(bpy)33+產(chǎn)生電化學(xué)信號,采用計時電流法測定,實現(xiàn)血清TBA超靈敏檢測。該方法測定血清 TBA的線性良好(5.0~150.0?mol/L,r=0.9983),靈敏度較高(LOD,0.40?mol/L)。精密度和回收率分別為(RSD,6

6、.4%~11.8%)和(91.4%~108%)。將建立的方法用于正常孕婦(20例)、ICP患者(30例)和AHP患者(22例)血清樣本測定并與酶循環(huán)法測定結(jié)果比較,相關(guān)性良好(r=0.9372)。與正常孕婦相比,ICP與AHP患者血清TBA均顯著增高。該方法靈敏、快速有望用于床旁檢測。
  3. AHP與ICP患者血清膽汁酸代謝輪廓分析。利用UPLC-TripleTOF-MS/MS對27例正常孕婦、26例AHP患者和59例ICP患

7、者血清中57種膽汁酸的代謝輪廓進行分析。采用PLS-DA顯示AHP患者的血清膽汁酸代謝輪廓與正常孕婦和 ICP孕婦均具有明顯差異,VIP值>1的24種膽汁酸,其中甘氨脫氧膽酸(GDCA)、?;侨u基膽汁酸的同分異構(gòu)體4(Ttri-4)、?;?ω-鼠膽酸(T-ω-MCA)、甘氨豬膽酸(GHCA)、甘氨三羥基膽汁酸同分異構(gòu)體3(Gtri-3)這5種膽汁酸在三組間均有顯著差異(P<0.05)。采用Logistic回歸篩選出疾病組(AHP和IC

8、P)與正常組的聯(lián)合診斷標志物甘氨膽酸(GCA)、甘氨三羥基膽汁酸同分異構(gòu)體1(Gtri-1)和?;嵌u基膽汁酸同分異構(gòu)體1(Tdi-1),ROC曲線下面積(AUC)為0.989,靈敏度98.9%,特異性100%;鑒別AHP與ICP的聯(lián)合診斷標志物石膽酸(LCA)、Gtri-1和鵝脫氧膽酸(CDCA),AUC為0.956,靈敏度92.1%,特異性91.7%。膽汁酸代謝輪廓分析與成分膽汁酸的檢測有助于臨床對AHP的認識,診斷與鑒別診斷。

9、r>  4.芯片-電化學(xué)法檢測血清TBA的方法學(xué)研究。固相萃?。⊿PE)預(yù)處理的血清樣本經(jīng)聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)芯片通道電驅(qū)動進樣后電泳到檢測池,血清膽汁酸與檢測池中的3α-HSD、Ru(bpy)32+和NAD+發(fā)生酶促偶聯(lián)-雙重氧化還原反應(yīng),生成的Ru(bpy)32+在SPCE電極上被氧化產(chǎn)生電信號,采用計時電流法進行分析。該方法測定血清TBA的線性良好(1.0~100.0?mol/L,r

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