基于細胞代謝組學的抗乙醇損傷活性評價方法的建立及應用.pdf

1、研究表明，食物中的生物活性物質，如白藜蘆醇、番茄紅素、兒茶素、槲皮素、多糖類、肽類物質等均可顯著改善乙醇對機體的損傷。細胞學方法因具有可模擬體內生理環(huán)境、實驗周期較短、成本較低等優(yōu)勢廣泛應用于抗乙醇損傷活性物質的評價。但傳統的細胞學方法檢測指標有限，無法對復雜的活性物質作用機制及活性強弱進行全面準確評價。細胞代謝組學以細胞代謝物為研究對象，可以反映擾動狀態(tài)下細胞表型和細胞活動。運用細胞代謝組學方法，有望建立一種新的抗乙醇損傷活性評價方法

2、，通過分析活性物質干預后細胞代謝物的變化對活性強弱進行全面分析及評價。本研究采用細胞代謝組學研究方法，以L-02細胞為研究對象，基于HPLC-MS技術平臺，通過對干預前后胞內代謝物的分析，結合多種模式識別技術，獲取與乙醇誘導肝細胞損傷相關的生物標志物，構建基于細胞代謝組學的抗乙醇損傷活性評價方法，并應用該方法評價油橄欖葉提取物活性。主要研究內容如下：
　　（1）乙醇誘導肝細胞損傷生物標志物的發(fā)現。首先通過MTT及ROS實驗篩選乙醇

3、及VC作用濃度及作用時間，采用HPLC-DAD對各組細胞代謝物進行分析，選取33個共有峰進行PCA、OPLS-DA模式識別分析，獲取與乙醇損傷相關的14個代謝物靶標。經對照品保留時間、加標法、LC-MS等方法對14個潛在生物標志物進行比對，最終確認8種潛在生物標志物，分別為：蘋果酸、氧化型谷胱甘肽、還原型谷胱甘肽、ATP、苯丙氨酸、AMP、硝基酪氨酸、色氨酸。
　　（2）基于細胞代謝組學的抗乙醇損傷活性評價方法的建立。以L-02細

4、胞為研究對象，以VC為標準物質，通過預先加入不同濃度VC干預后對細胞進行乙醇損傷，對細胞代謝物進行HPLC分析，以前期篩選的潛在生物標志物為變量，在對照組與模型組的OPLS-DA模型基礎上，對不同濃度VC組進行得分散點分布及Y值預測，進而得到不同濃度VC抗乙醇損傷活性的定性及定量結果，建立VC濃度與Y預測值的回歸方程，將1μg/mL VC的活性能力定義為一個活性單位，建立基于細胞代謝組學的抗乙醇損傷活性評價方法。
　?。?）基于細

5、胞代謝組學的抗乙醇損傷活性評價方法的應用。①對19個品種油橄欖葉8種營養(yǎng)成分及3種活性成分含量進行測定，并運用聚類分析及主成分分析兩種模式識別方法對結果進行分析，結果表明膳食纖維、還原糖、橄欖苦苷是油橄欖葉的特征成分，與油橄欖葉品質密切相關，并將其分為3類，即高膳食纖維+低橄欖苦苷+低還原糖、中膳食纖維+高橄欖苦苷+高還原糖、低膳食纖維+中橄欖苦苷+高還原糖。②采用建立的基于細胞代謝組學的抗乙醇損傷活性評價方法評價不同部位油橄欖葉提取物