兩種海洋微藻多糖抑制腫瘤血管生成活性的研究.pdf

1、本文以米氏凱倫藻、小球藻兩種海洋微藻為材料，優(yōu)化了米氏凱倫藻多糖的制備工藝，經(jīng)乙醇分級沉淀獲得微藻多糖，并對微藻多糖進行抑制腫瘤血管生成活性及在分子水平上研究其對相關蛋白的表達。
　　通過比較索氏提取法、超聲提取法、閃式破碎提取法、閃式破碎結合蛋白酶水解法對米氏凱倫藻多糖提取率的影響，選擇閃式破碎結合酶解方法提取多糖，優(yōu)選堿性蛋白酶進行酶解，確定米氏凱倫藻多糖酶解較優(yōu)的提取條件為：酶解溫度40℃、酶解pH8.5、酶用量為藻粉重量的

2、2.5％、酶解時間為2h，在此條件下米氏凱倫藻多糖的提取率可達9.71%。30%、50%、80%乙醇分級沉淀依次獲得米氏凱倫藻多糖組分KPS1、KPS2、KPS3和小球藻多糖組分CPS1、CPS2、CPS3。
　　采用雞胚絨毛尿囊膜血管生成模型實驗，對上述微藻多糖進行活性篩選，篩選出KPS1、KPS2、CPS1、CPS2均具有抑制血管生成的潛在作用。
　　采用MTT法（四氮唑藍試驗）測定發(fā)現(xiàn)，六種微藻多糖對正常狀態(tài)下人臍靜脈

3、內(nèi)皮細胞的生長基本沒有毒性。10%的人肝癌細胞培養(yǎng)液能夠明顯促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖，而米氏凱倫藻多糖和小球藻多糖能夠在一定程度上拮抗腫瘤細胞培養(yǎng)液對人臍靜脈內(nèi)皮細胞生長的誘導作用。
　　通過細胞劃痕愈合實驗（Wound Healing assay）發(fā)現(xiàn)10%人肝癌細胞培養(yǎng)液能夠明顯促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞的遷移，米氏凱倫藻多糖中KPS1、KPS2能拮抗其誘導作用，一定濃度范圍內(nèi)其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴關系。小球藻多糖中CPS1、CP

4、S2對肝癌細胞誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移抑制作用較為突出，其中CPS2在5μg/mL-100μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的濃度梯度趨勢。
　　通過WesternBlot實驗發(fā)現(xiàn)，肝癌細胞誘導的人臍靜脈細胞MMP-9和VEGF相關蛋白表達量增高，米氏凱倫藻多糖KPS1在100μg/mL時對MMP-9的表達具有顯著的抑制作用（P＜0.05）推測米氏凱倫藻多糖可能是通過抑制內(nèi)皮細胞中MMP-9相關蛋白的表達來實現(xiàn)其抑制腫瘤血管生成的活性。

5、米氏凱倫藻多糖KPS2、KPS3均有不同程度的抑制誘導其VEGF相關蛋白表達的增加，其中KPS2在濃度50μg/mL、100μg/mL中均有顯著抑制作用。
　　小球藻多糖并沒有明顯的抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞中MMP-9相關蛋白的表達，推測小球藻多糖抑制腫瘤血管生成活性可能不是通過MMP-9因子相關蛋白的表達來實現(xiàn)的。小球藻多糖均有不同程度的降低HUVECs中VEGF蛋白的表達，其中以CPS1和CPS3在濃度為100μg/mL下具有較為