地榆活性成分抑制腫瘤血管生成作用及機理研究.pdf

1、目的：篩選地榆抗腫瘤血管生成活性成分，研究地榆活性成分抗腫瘤血管生成作用，并探討其作用機制。
　　方法：①地榆抗腫瘤血管生成活性部位篩選：采用系統(tǒng)溶劑提取法制備地榆石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水共5個不同極性部位；以HUVEC、MCF-7、Bel-7402三種細(xì)胞增殖模型，采用SRB染色法篩選地榆抗腫瘤血管生成的活性部位；②活性部位餾分分離、活性餾分篩選與鑒定：采用制備型HPLC從地榆正丁醇活性部位中分離不同餾分；以HUVEC

2、、MCF-7、Bel-7402三種細(xì)胞增殖模型，采用SRB染色法篩選地榆抗腫瘤血管生成活性餾分；面積歸一化法計算樣品的純度，MS和H-NMR對活性成分進行結(jié)構(gòu)鑒定。③活性成分（鞣花酸）抗腫瘤血管作用研究：以 HUVEC細(xì)胞模型，采用SRB法、劃痕法及 Matrigel體外成管實驗分別考察鞣花酸對HUVEC增殖、遷移及小管形成的影響；體內(nèi)建立S180、H22皮下荷瘤小鼠模型，隨機分為模型組（0.5％CMC溶液）、環(huán)磷酰胺組（陽性對照，20

3、 mg/kg）、鞣花酸高、中、低（200、100、50 mg/kg）劑量組，連續(xù)給藥10 d，觀察鞣花酸對荷瘤小鼠腫瘤生長、體重、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的影響，免疫組化法檢測腫瘤微血管密度。④鞣花酸抗腫瘤血管作用機理研究：采用RT-PCR法、ELISA法、Western blotting法分別觀察鞣花酸對HUVEC細(xì)胞PDGFB mRNA表達、對細(xì)胞上清中PDGFB分泌及對細(xì)胞中PDGFB、STAT3、p-STAT3蛋白表達水平的影響；免疫

4、組化法測定S180、H22荷瘤小鼠腫瘤組織中PDGFB、p-STAT3及STAT3的表達情況。
　　結(jié)果：①地榆正丁醇提取部位顯著抑制 HUVEC、MCF-7、Bel-7402三種細(xì)胞增殖（P<0.01或P<0.05）。②從正丁醇部位中共獲得22種餾分（1~22#）；5#餾分（20μg/mL）對HUVEC、MCF-7、Bel-7402三種細(xì)胞增殖均有顯著抑制作用（P<0.01或P<0.05）；MS、H-NMR結(jié)果顯示，5#餾分為鞣

5、花酸。③鞣花酸（20、10、5μg/mL）顯著抑制HUVEC增殖、遷移和小管形成（P<0.01或P<0.05），其增殖抑制作用呈時間和濃度依賴性，其遷移和小管形成抑制作用呈劑量依賴性。④鞣花酸（200，100，50 mg/kg）顯著抑制S180、H22小鼠腫瘤生長，對小鼠體重?zé)o影響。鞣花酸高劑量組對 S180、H22小鼠脾臟指數(shù)較模型組顯著上升（P<0.05）。鞣花酸高、中劑量組能顯著降低S180、H22小鼠腫瘤微血管密度（P<0.05

6、）。⑤鞣花酸（20、10、5μg/mL）能顯著降低HUVEC細(xì)胞中PDGFB基因和蛋白表達水平（P<0.01或P<0.05），降低STAT3蛋白的磷酸化水平（P<0.01或P<0.05），而對STAT3蛋白表達總量無變化。與模型組比較，鞣花酸給藥組在S180、H22兩種瘤體中PDGFB、p-STAT3和STAT3的表達明顯降低。
　　結(jié)論：地榆活性成分鞣花酸具有良好的抗腫瘤及抗腫瘤血管生成作用，其機制可能與下調(diào)PDGFB表達并抑制