地榆總皂苷促血小板生成作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：探討地榆總皂苷的促血小板生成作用及其對血小板生成起重要調(diào)控作用的靶點(diǎn)TPO/c-mpl及SCF/c-kit的影響，以明確地榆總皂苷促血小板生成作用的機(jī)理。
　　方法：通過體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究了地榆總皂苷的促血小板生成作用及其機(jī)理，體內(nèi)研究方法：采用環(huán)磷酰胺造成小鼠血小板減少癥動物模型的方法，于造模的同時(shí)給予地榆總皂苷（1，0.5，0.1mg/kg）溶液進(jìn)行治療，于造模后第4、7、10天眼叢取血測定小鼠外周血象指標(biāo)。體外研究方法

2、：①M(fèi)TT法檢測地榆總皂苷對TPO依賴性Baf3/Mpl細(xì)胞增殖水平的影響。②CCK8法檢測地榆總皂苷對IL-3依賴性Baf3細(xì)胞增殖水平的影響。③CCK8法檢測地榆總皂苷對IL-3依賴性32D細(xì)胞增殖水平的影響。④Giemsa染色法檢測地榆總皂苷對32D細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。⑤RT-PCR法檢測地榆總皂苷對Baf3/Mpl細(xì)胞中TPO受體mRNA表達(dá)水平的影響。⑥RT-PCR法檢測地榆總皂苷對32D細(xì)胞中c-kit mRNA表達(dá)水平的影響

3、。⑦熒光探針法檢測地榆總皂苷對HEL細(xì)胞中c-kit mRNA表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：地榆總皂苷能顯著的升高造模后小鼠的白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板水平。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①在不含TPO的培養(yǎng)條件下，Baf3/Mpl細(xì)胞增殖明顯受抑制；在含TPO的培養(yǎng)條件下，Baf3/Mpl細(xì)胞增殖明顯；當(dāng)同時(shí)加入TPO和質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷后，細(xì)胞增殖更為明顯，且優(yōu)于TPO單獨(dú)處理組；在不含 TPO培養(yǎng)條件下，地榆總皂苷

4、單獨(dú)處理細(xì)胞，也能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖。②在不含IL-3的培養(yǎng)條件下，Baf3細(xì)胞增殖明顯受抑制；在含IL-3的培養(yǎng)條件下，Baf3細(xì)胞增殖明顯；當(dāng)同時(shí)加入IL-3和質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷后，細(xì)胞增殖更為明顯，且優(yōu)于IL-3單獨(dú)處理組；在不含IL-3培養(yǎng)條件下，地榆總皂苷單獨(dú)處理細(xì)胞，也能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖，且呈時(shí)間依賴。③在缺乏IL-3培養(yǎng)條件時(shí)，細(xì)胞增殖明顯受抑制，但在含IL-3的培養(yǎng)條件下，32D細(xì)胞增殖明顯；在不含 IL

5、-3的培養(yǎng)條件下加入質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷后，細(xì)胞數(shù)量明顯增加，并呈時(shí)間依賴。④質(zhì)量濃度為40μg/ml的地榆總皂苷單獨(dú)處理32D細(xì)胞4天后，多倍體巨核細(xì)胞數(shù)量增加，且胞體變大；當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間延長至9天時(shí)可明顯誘導(dǎo)多倍體巨核細(xì)胞數(shù)增加，促進(jìn)巨核細(xì)胞成熟分化。⑤質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷單獨(dú)處理細(xì)胞48h能明顯上調(diào)Baf3/Mpl細(xì)胞中TPO受體mRNA的表達(dá)水平。⑥質(zhì)量濃度為10μg/ml的地榆總皂苷單獨(dú)處理細(xì)胞48