三七總皂苷介導(dǎo)大鼠肝CYP450酶蛋白表達(dá)及作用機(jī)理研究.pdf

1、1、三七總皂苷對(duì)大鼠肝CYP450酶蛋白表達(dá)影響研究。
　　 大鼠連續(xù)5周靜脈注射給予三七總皂苷注射液20mg/kg，每周稱體重一次，最后一次給藥結(jié)束后對(duì)大鼠肝臟進(jìn)行稱重，計(jì)算大鼠肝指數(shù)；并行HE染色、免疫組化和western blot實(shí)驗(yàn)，觀察長(zhǎng)期給藥后大鼠的安全性、CYP450酶蛋白亞型在大鼠肝臟中的表達(dá)。結(jié)果顯示長(zhǎng)期給予三七總皂苷注射液后，大鼠每周體重增加正常，與生理鹽水組比較無顯著差異，肝臟指數(shù)未見異常，光鏡下三七總皂苷

2、注射液組和生理鹽水組大鼠肝臟中央靜脈及其周圍放射狀排列的肝細(xì)胞索清晰可見，具有正常的肝小葉結(jié)構(gòu)，肝星狀細(xì)胞未見異常，匯管區(qū)形態(tài)正常，肝臟組織未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死現(xiàn)象出現(xiàn)，表明長(zhǎng)期給予三七總皂苷注射液是安全的；Westernblot實(shí)驗(yàn)證實(shí)長(zhǎng)期給予三七總皂苷注射液后，通過比較CYP2E1、CYP3A4、CYP1A2和CYP2C9蛋白與內(nèi)參蛋白β-tublin的光密度值數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)CYP3A4在大鼠肝臟中具有較高的表達(dá)，與其他CYP450酶亞

3、型的表達(dá)具有顯著差異(p＜0.01)；三七總皂苷注射液長(zhǎng)期給藥后，對(duì)CYP3A4、CYP1A2和CYP2C9蛋白的表達(dá)與生理鹽水組比較無顯著差異，但有抑制上述蛋白在肝臟中表達(dá)的趨勢(shì)；而長(zhǎng)期給藥后會(huì)誘導(dǎo)CYP2E1酶的表達(dá)，與生理鹽水組比較具有顯著差異(p＜0.05)；免疫組化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)了上述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。
　　 2、尼莫地平和華法林鈉大鼠血漿分析方法的建立和優(yōu)化。
　　 建立了靈敏度高，分析時(shí)間短的大鼠血漿中尼莫地平和華

4、法林鈉的HPLC分析方法。采用乙腈一步沉淀法提取大鼠血漿中的尼莫地平和華法林鈉。優(yōu)化的色譜條件如下，尼莫地平：色譜柱：SinoChromODS-BP柱(5μm,250mm×4.6mm I.D.)；流動(dòng)相為：乙腈-水(70:30)；流速：1.2mL/min；柱溫：40℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm，進(jìn)樣量：30μL；華法林鈉：流動(dòng)相為：乙腈:水:冰醋酸=70:30:0.4；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：λ=308n

5、m；進(jìn)樣量：30μL。尼莫地平和華法林鈉在大鼠血漿中的最低定量限分別為0.125和0.25μg/mL，通過方法學(xué)的考證，上述物質(zhì)在大鼠血漿中的線性、回收率、穩(wěn)定性、日內(nèi)和日間變異均符合生物樣品的測(cè)定要求。
　　 3、三七總皂苷對(duì)CYP450酶底物藥代動(dòng)力學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 尼莫地平在生理鹽水組和三七總皂苷組大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如t1/2β、AUC(0-t)、V1、CL、MRT(0-t)分別為0.556、0.452h

6、；1.379、1.555mg/L*h；1.307、0.902L/kg；3.082、2.809L/h/kg和0.563、0.524h，均未見有顯著差異，但有增加AUC(0-t)和降低血漿清除率趨勢(shì)，血藥濃度-時(shí)間曲線圖上可以看出三七總皂苷長(zhǎng)期誘導(dǎo)后尼莫地平在大鼠體內(nèi)血藥濃度有所增加，產(chǎn)生的這一結(jié)果可能是由于三七總皂苷對(duì)大鼠肝CYP3A4酶產(chǎn)生一定的抑制作用；華法林鈉在正常和三七總皂苷組大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2β、Cmax、Tmax、A

7、UC(0-t)、V1、CL、MRT(0-t)分別為21.77、27.72h；66.73、56.22μg/mL；1.8、2.7h；1321.59、1401.41mg/L*h；0.395、0.475L/kg；0.013、0.013L/h/kg，17.01、19.92h，組間未見明顯差異，但三七總皂苷組大鼠Cmax有所降低而Tmax有所延長(zhǎng)，t1/2β、AUC(0-t)、AUC(0-∞)、及MRT(0-t)等均有所延長(zhǎng)，表明華法林鈉經(jīng)三七總皂