脂肪乳劑致大鼠脂肪肝和骨質(zhì)疏松及三七總皂苷的防治作用.pdf

1、目的： 1.用長(zhǎng)期脂肪乳劑灌胃的方法建立大鼠高脂血癥、非酒精性脂肪肝性肝炎及高脂血癥性骨質(zhì)疏松的復(fù)合模型。 2.研究三七總皂苷(PNS)對(duì)大鼠高脂血癥、非酒精性脂肪肝性肝炎及高脂血癥性骨質(zhì)疏松的是否有防治作用，初步探討其預(yù)防作用的機(jī)制。 方法： 取SPF級(jí)3月齡未交配SD大鼠30只(雌雄各半，體重230.5±27.8g)，隨機(jī)分為3組，每組10只。1組為正常對(duì)照組(普通飼料喂養(yǎng)，蒸餾水5ml·kg-1·d

2、-1灌胃)，2組為模型組(脂肪乳劑5ml·kg-1·d-1灌胃)，3組為實(shí)驗(yàn)組(上午予脂肪乳劑5ml·kg-1·d-1灌胃，下午予PNS 200mg·kg-1·d-1灌胃)，連續(xù)20周。 所有大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第14日、13日和第4日、3日分別皮下注射鹽酸四環(huán)素和鈣黃綠素。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠心臟取血處死，分離血清檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力，并測(cè)定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高

3、密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、游離脂肪酸(FFA)及丙二醛(MDA)含量；按公式計(jì)算動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)：肝臟稱重，肝組織部分石蠟包埋制片HE染色觀察病理形態(tài)變化及評(píng)分，免疫組化方法檢測(cè)肝組織細(xì)胞色素P450 2E1的表達(dá)；部分制勻漿測(cè)定肝組織TG、TC、FFA及MDA、SOD含量；右側(cè)脛骨制作成不脫鈣組織切片，進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的測(cè)定；右側(cè)尺骨用于骨羥脯氨酸(Hyp)、礦物質(zhì)及微量元素的測(cè)

4、定；右側(cè)股骨用于骨生物力學(xué)測(cè)定。 結(jié)果： 1.脂肪乳劑對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)、肝臟和骨骼的影響①脂肪乳劑可致大鼠高脂血癥：與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清TC、LDL-c、FFA均明顯升高(P<0.01)，HDL-c降低(P<0.01)，AI明顯升高(P<0.01)，IG濃度未見(jiàn)顯著性差異；SOD活力顯著降低(P<0.01)，MDA含量顯著增高(P<0.01)。 ②脂肪乳劑可致大鼠非酒精性脂肪性肝炎：與正常對(duì)照組比較

5、，模型組大鼠肝濕重和肝重指數(shù)明顯升高(P<0.01)，血清ALT、AST明顯升高(P<0.01)；肝病理切片可見(jiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、水樣變性、壞死和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但未出現(xiàn)肝纖維化；肝組織CYP2E1表達(dá)增強(qiáng)，彌散性分布于肝細(xì)胞3區(qū)到2區(qū)，與肝細(xì)胞脂肪變的分布相一致；肝組織中TC、TG、FFA、MDA均明顯升高(P<0.01)、SOD明顯減低(P<0.01)；CYP2E1顯色指數(shù)與肝組織MDA、FFA含量呈正相關(guān)(r值分別為0.9864、0.

6、9235，P值均小于0.01)，而與SOD含量呈負(fù)相關(guān)(r=0.9190，P<0.05)。 ③脂肪乳劑可致大鼠骨質(zhì)疏松：與正常對(duì)照組相比，松質(zhì)骨靜態(tài)參數(shù)骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb.Ar)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)均降低(P<0.01)，骨小梁分離度(Tb.Sp)明顯增加(P<0.01)；動(dòng)態(tài)參數(shù)熒光周長(zhǎng)百分率(％L.Pm)、骨形成率(BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV)均明顯降低(P<0.05)；生物

7、力學(xué)檢測(cè)最大載荷、斷裂載荷、彈性載荷、最大撓度、剛度系數(shù)均顯著降低(P<0.01)；骨Hyp含量顯著降低(P<0.01)，骨Ca、P及微量元素Zn、Mg、Fe含量均降低(P<0.05)。 2.PNS對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)、肝臟和骨骼的影響①PNs對(duì)脂肪乳劑所致大鼠高脂血癥有防治作用：與模型組比較，PNS組大鼠血清TC、LDL-c、FFA明顯降低(P<0.05)，HDL-c明顯升高(P<0.05)，AI減小(P<0.05)；SOD活力

8、增高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.01)，但未恢復(fù)至正常水平。 ②PNS對(duì)脂肪乳劑可致大鼠非酒精性脂肪性肝炎有防治作用：與模型組比較，PNS組大鼠肝濕重明顯降低(P<0.05)、肝重指數(shù)減小(P<0.01)；AST、ALT均恢復(fù)至正常對(duì)照組水平(P>0.05)；肝病理切片可見(jiàn)輕度肝細(xì)胞脂肪變和水樣變，無(wú)明顯的肝細(xì)胞壞死和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；CYP2E1表達(dá)與正常對(duì)照組相似，少數(shù)脂滴周圍有弱陽(yáng)性著色，與模型組相比，CYP2E

9、1的表達(dá)受到了明顯的抑制；肝組織TC、TG、MDA均降低至正常對(duì)照組水平(P<0.01)，F(xiàn)FA明顯降低(P<0.05)，SOD活力明顯增高(P<0.01)。 ③PNS對(duì)脂肪乳劑所致大鼠高脂血癥性骨質(zhì)疏松有一定防治作用：與模型組比較，松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)參數(shù)％Tb.Ar、Tb.N、Tb.Th均增加(P<0.01)，Tb.Sp明顯減小(P<0.01)；動(dòng)態(tài)參數(shù)％L.Pm、BFR/BS、BFR/BV均明顯增加(P<0.05)；生物力

10、學(xué)檢測(cè)股骨最大載荷、彈性載荷、剛度系數(shù)均顯著升高(P<0.01)，斷裂載荷、最大撓度明顯升高(P<0.05)；骨Hyp含量顯著增高(P<0.01)，骨Ca、P、Zn、Mg、Fe的含量無(wú)顯著性差異。 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)采用的脂肪乳劑長(zhǎng)期灌胃可導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)血清TC升高、HDL-c降低為特征的脂質(zhì)代謝紊亂，與人類IIa型高脂血癥相似；成功建立了大鼠非酒精性脂肪性肝炎和高脂血癥性骨質(zhì)疏松的復(fù)合模型。 2.PNS可能通過(guò)抑