熒光比率法檢測過氧亞硝酸根陰離子的研究以及CdTe量子點-米托蒽醌復合物的形成及其應用研究.pdf

1、本論文研究內容分為兩部分。第一部分為熒光比率法表征過氧亞硝酸根陰離子(ONOO-)的方法研究，及基于此建立抗癌藥物米托蒽醌抑制二氧化氮自由基作用評價的比率熒光法研究；第二部分為CdTe量子點-米托蒽醌復合物的形成及應用于核酸檢測的初步研究。第二部分內容是基于課題組現(xiàn)行研究課題的新的發(fā)展方向，為實驗中觀察到的現(xiàn)象的拓展。 第一部分第一章首先簡要介紹了活性氧自由基的定義及研究意義；綜述了ONOO-的形成、分解、性質及其表征方法；系統(tǒng)

2、闡述了熒光比率法的檢測原理和應用的研究進展，并在此基礎上提出了本論文第一部分的研究設想，引用參考文獻160篇。 第一部分第二章對熒光比率法檢測過氧亞硝酸根陰離子的方法進行了研究，該章共分為三節(jié)。 第一節(jié)：基于鋱絡合物發(fā)光的熒光比率法檢測ONOO-的研究。ONOO-在弱酸性介質中易質子化生成其共軛酸(ONOOH)，ONOOH均裂生成·OH?！H作用于對苯二甲酸發(fā)生芳環(huán)羥基化反應，生成強熒光物質鄰羥基對苯二甲酸。對苯二甲酸

3、具有敏化鋱發(fā)光的特性，羥基化導致其敏化活性消失。因此，在對苯二甲酸一鋱敏化發(fā)光體系中加入ONOO-，將觀察到鋱的特征發(fā)射受到抑制，同時伴隨著鄰羥基對苯二甲酸的特征發(fā)射峰的出現(xiàn)的現(xiàn)象，且隨著ONOO-濃度的加大，430 nm處的鄰羥基對苯二甲酸特征發(fā)射與545 nm處的鋱?zhí)卣靼l(fā)射之比值呈增大的趨勢，從而可以利用這兩個峰的強度變化比來表征ONOO-。 第二節(jié)：基于芘激基締合物形成的熒光比率法檢測ONOO-的初步研究。該項研究的基本思

4、路是發(fā)展基于芘的二聚體一單體平衡的、以ONOO-為目標分子的比率型熒光探針，即以芘分子標記酪胺，當酪胺與目標分子ONOO-作用時易發(fā)生二聚，酪胺的二聚，拉近了分別標記于兩個酪胺分子上的芘分子，兩個芘分子由于距離接近而出現(xiàn)激基締合物發(fā)射，與之同時，伴隨著單體發(fā)射的熒光峰減弱，激基締合物態(tài)與單體態(tài)發(fā)射的熒光強度之比IE/IM應與目標分子ONOO-的濃度相關，以此為基礎發(fā)展建立基于熒光比率原理的ONOO-熒光分析法。這部分實驗只進行了初步的探

5、索，尚未達到預期的效果。 第三節(jié)：基于酪氨酸二聚的同步熒光法比率法檢測ONOO-的研究。酪氨酸與目標分子ONOO-作用時，如果控制酪氨酸的濃度遠大于ONOO-，可得到單體發(fā)射恒定不變而二聚體的發(fā)射則隨目標分子的濃度的增大而增強的同步發(fā)射光譜特征。采用同步熒光掃描，以酪氨酸自身的熒光作內參比，二聚酪氨酸的熒光強度與酪氨酸自身的熒光強度的比值與ONOO-的濃度在一定范圍內呈線性相關，且能不受儀器測試參數(shù)改變影響，從而建立了一種基于內

6、參比的同步熒光比率檢測ONOO-的方法。 第一部分第三章是在第二章第三節(jié)的實驗結果的基礎上，建立了用于評價抗癌藥米托蒽醌清除二氧化氮自由基效力的熒光法。二氧化碳催化ONOO-產生·NO2，·NO2誘導強熒光酪氨酸二聚體形成。米托蒽醌具有抗氧化活性，當體系中引入米托蒽醌時，米托蒽醌與酪氨酸競爭·NO2，抑制酪氨酸二聚，表現(xiàn)為二聚體熒光強度降低。據此建立了一種間接表征米托蒽醌抗氧化效力的方法。 第一部分第四章是對第一部分的研

7、究工作的總結，指出工作的不足，并對研究工作的前景提出了設想。 第二部分第一章首先簡要介紹了量子點及其復合物研究意義，并在此基礎上提出了研究的設想。然后根據文獻合成了水溶性的巰基乙酸包裹的CdTe量子點，進而依據靜電作用原理，制備了量子點-米托蒽醌(QD-MXT)復合物。與CdTe量子點具有強發(fā)光特性形成強烈反差的是該復合物中量子點的熒光幾乎完全猝滅，為一非熒光復合物。當QD-MXT復合物作用于DNA后，由于DNA與米托蒽醌發(fā)生分