高效液相色譜法測(cè)定杜仲中主要成分和食品中大豆異黃酮.pdf

1、高效液相色譜法(HPLC)是在氣相色譜法和經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型分析分離技術(shù)。鑒于其快速、準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，至今，已在食品工業(yè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、生物工程、制藥工業(yè)、石油化工等領(lǐng)域獲得廣泛的應(yīng)用。本文由緒論和研究報(bào)告兩部分組成。緒論部分簡(jiǎn)單概述了高效液相色譜法、色譜技術(shù)方面的進(jìn)展、高效液相色譜在杜仲有效成分分析中的應(yīng)用和大豆異黃酮的研究進(jìn)展。研究報(bào)告部分建立了杜仲中綠原酸和蘆丁HPLC法測(cè)定和食品中大豆異黃酮含量的HPLC法

2、測(cè)定，包括：HPLC法測(cè)定豆奶粉中四種大豆異黃酮含量；不同豆類中四種大豆異黃酮的HPLC法測(cè)定；HPLC法測(cè)定綠豆芽中四種大豆異黃酮的含量。
　　 ⑴HPLC法測(cè)定杜仲中綠原酸和蘆丁。建立HPLC法測(cè)定杜仲中綠原酸和蘆丁含量，并對(duì)不同產(chǎn)地杜仲中綠原酸和蘆丁含量進(jìn)行測(cè)定。采用phenomenex C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，以甲醇-冰醋酸(pH=3.10)(45∶55)為流動(dòng)相洗脫，體積流量為0.8 mL/

3、min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm，采用外標(biāo)法測(cè)定不同產(chǎn)地杜仲中綠原酸和蘆丁的含量。綠原酸和蘆丁分別在0.1275～24.0000μg/mL(r=0.9996)、0.1250～25.0000μg/mL(r=0.9996)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.23％和97.13％，RSD分別為1.02％和2.98％。本方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好，為不同產(chǎn)地杜仲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步研究提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 ⑵HPLC法測(cè)定豆奶粉

4、中四種大豆異黃酮含量。本文建立了同時(shí)測(cè)定豆奶粉中四種大豆異黃酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色譜法，同時(shí)對(duì)從豆奶粉中提取大豆異黃酮的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。采用日本島津LC-20A高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定的色譜條件為：色譜柱為phenomenex C18(150mm×4.6 mm，5.0μm)，采用乙腈-0.2％甲酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木

5、素的線性范圍分別是0.74～100.00μg/mL，0.74～200.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，線性關(guān)系良好；加樣回收率(n=9)分別為100.01％，100.01％，99.48％，99.91％，方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，適用于豆奶粉中這四種大豆異黃酮成分的含量測(cè)定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。從豆奶粉中提取大豆異黃酮的最佳工藝為：用70％的乙醇在60℃條件下超聲提取40

6、min。
　　 ⑶不同豆類中4種大豆異黃酮的HPLC法測(cè)定。建立同時(shí)測(cè)定豆類中大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素四種大豆異黃酮成分含量的高效液相色譜法，色譜柱為phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)，采用流動(dòng)相乙腈-0.2％甲酸進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。探討了提取黑豆中四種大豆異黃酮的最佳條件，結(jié)果顯示，70％的乙醇在60℃超聲提取40 min，效果最佳。

7、大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的線性范圍分別是0.74～100.00μg/mL，0.74～400.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，線性關(guān)系良好；加樣回收率(n=9)分別為99.81％，99.99％，99.49％，99.89％，本方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，適用于豆類中這四種大豆異黃酮成分的含量測(cè)定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。
　　 ⑷HPLC法測(cè)定綠豆芽中四種大豆異

8、黃酮的含量。本文建立了同時(shí)測(cè)定綠豆芽中四種大豆異酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色譜方法，對(duì)從綠豆芽中提取四種大豆異黃酮的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最佳工藝為：用60％的乙醇在55℃條件下超聲提取60 min，料液比為1:12，同時(shí)探究了綠豆發(fā)芽不同天數(shù)四種大豆異黃酮的含量。采用日本島津LC-20A高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定的色譜條件為：色譜柱為phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)，采用乙腈-

9、0.2％甲酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的線性范圍分別是0.74～100.00μg/mL，0.74～200.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，線性關(guān)系良好；加樣回收率(n=9)分別為99.99％，100.01％，100.07％，99.81％，該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，為日常生活中綠豆芽