吸收、熒光和共振瑞利散射光譜法測定秋水仙堿、白藜蘆醇和胃蛋白酶的新方法研究.pdf

1、本文主要研究秋水仙堿、白藜蘆醇等藥物與染料、無機酸根、氨基酸等小分子以及與胃蛋白酶等大分子相互作用時對吸收光譜、熒光光譜和共振瑞利散射光譜的影響。研究了適宜的反應(yīng)條件，影響因素及分析化學性質(zhì)，發(fā)展和建立了測定上述藥物和胃蛋白酶的一些新分光光度法、熒光法和共振瑞利散射法。主要研究內(nèi)容如下： (1)秋水仙堿水解產(chǎn)物-某些酸性磺酞類染料體系：共振瑞利散射法測定秋水仙堿。 在pH2.9～4.6BR緩沖溶液中，秋水仙堿的水解產(chǎn)物(

2、H—COL)能與溴酚藍(BPB)、溴甲酚綠(BCG)、溴百里酚藍(BTB)和百里酚藍(TB)等酸性磺酞類染料(ASPD)反應(yīng)形成1：1的離子締合物，此時將引起共振瑞利散射(RRS)的急劇增強，并產(chǎn)生新的RRS光譜。秋水仙堿水解產(chǎn)物與溴酚藍、溴甲酚綠、溴百里酚藍和百里酚藍形成離子締合物的最大散射波長分別位于327，311，305和306nm處。散射增強(△I)與秋水仙堿濃度在一定范圍內(nèi)成正比，不同體系對于秋水仙堿的檢出限分別為12.3，1

3、5.1，16.4和20.0ng·mL-1(TB)。研究了適宜的反應(yīng)條件，考察了共存物質(zhì)的影響，表明方法有較好的選擇性?；谇锼蓧A水解產(chǎn)物與酸性磺酞類染料離子締合物的反應(yīng)，發(fā)展了一種較靈敏，且簡便、快捷測定秋水仙堿的新方法。方法用于片劑、黃花、血清和尿樣中秋水仙堿的測定，獲得了滿意的結(jié)果。 (2)秋水仙堿-三種氨基酸體系：熒光猝滅法測定秋水仙堿。 在pH1.2-3.6的HCl—NaAc酸性介質(zhì)中，秋水仙堿與酪氨酸(Tyr

4、)、色氨酸(Trp)和苯丙氨酸(Phe)具有熒光的3種氨基酸發(fā)生相互作用，此時將導(dǎo)致這些氨基酸的熒光發(fā)生猝滅，最大猝滅波長分別位于位于350nm、304nm和284nm。在一定范圍內(nèi)其熒光猝滅程度分別與秋水仙堿的濃度成正比，三種體系的熒光猝滅值(△F)分別在0.05-5.0μg/mL、0.06-5.5μg/mL和0.3-10μg/mL范圍內(nèi)與秋水仙堿的濃度成正比，因此可用于秋水仙堿的測定。其中以酪氨酸(Tyr)體系靈敏度最高，而苯丙氨酸

5、(Phe)體系靈敏度較低，本文重點研究了酪氨酸作探針熒光猝滅法測定秋水仙堿的適宜條件，影響因素，提出了一種新的利用氨基酸熒光猝滅反應(yīng)測定痕量秋水仙堿的新方法。 (3)秋水仙堿-磷鎢雜多酸：共振瑞利散射和共振非線性散射法測定秋水仙堿。 在0.4mol/L的H2SO4介質(zhì)中，秋水仙堿能與磷鎢雜多酸反應(yīng)形成締合產(chǎn)物。此時將引起共振瑞利散射(RRS)、二級散射(SOS)和倍頻散射(FDS)顯著增強，并且出現(xiàn)新的散射光譜。其最大R

6、RS、SOS和FDS波長分別位于381nm、750nm和390nm附近。在一定范圍內(nèi)，三種散射增強(△IRRS、△ISOSs和△IFDS)與秋水仙堿濃度成正比，方法具有高靈敏度，三種方法對于秋水仙堿的檢出限分別在8ng/mL(RRS)、19ng/mL(SOS)和28ng/mL(FDS)，均可用于痕量秋水仙堿的測定。本文研究了秋水仙堿與磷鎢雜多酸的反應(yīng)對RRS、SOS和FDS光譜特征和強度的影響，考察了適宜的反應(yīng)條件，并以RRS為例考察了

7、共存物質(zhì)的影響。據(jù)此，利用秋水仙堿與磷鎢雜多酸的反應(yīng)發(fā)展了一種用共振光散射技術(shù)、靈敏度高、簡便、快速測定秋水仙堿的新方法。 (4)秋水仙堿-胃蛋白酶體系：共振瑞利散射法測定胃蛋白酶。 在pH1.9-3.8的酸性介質(zhì)中，秋水仙堿的水解產(chǎn)物(H—COL)與胃蛋白酶(pepsin)反應(yīng)形成結(jié)合產(chǎn)物，能引起共振瑞利散射(RRS)的顯著增強，并產(chǎn)生新的RRS光譜。最大的RRS峰位于406nm處，另一散射峰位于282nm處，其散射強

8、度(△I)與胃蛋白酶的濃度成正比，常見的金屬離子以及一定量的其他蛋白酶和血清蛋白不干擾，方法具有良好的選擇性，其線性范圍在0.018～3.5μg/mL，反應(yīng)具有較高靈敏度，對胃蛋白酶的檢出限為5.4ng/mL?；谏鲜鲅芯?，發(fā)展了一種用RRS技術(shù)高靈敏，高選擇性，且簡便測定胃蛋白酶的方法。文中還對反應(yīng)機理進行了討論。 (5)白藜蘆醇—HAuCl4體系：共振瑞利散射和共振非線性散射法測定白藜蘆醇。 在pH12-14的堿性介

9、質(zhì)中，白藜蘆醇與HAuCl4的反應(yīng)將引起共振瑞利散射(RRS)、二級散射(SOS)和倍頻散射(FDS)顯著增強，并且出現(xiàn)新的散射光譜。其最大RRS、SOS和FDS波長分別位于396nm、540nm和393nm附近。在一定范圍內(nèi)，三種散射增強(△IRRS、△ISOS和△IFDS)與白藜蘆醇濃度成正比，方法具有高靈敏度，三種方法對于白藜蘆醇的檢出限分別在8.1ng/mL(RRS)、22.4ng/mL(SOS)和15.3ng/mL(FDS)，

10、均可用于痕量白藜蘆醇的測定。本文研究了白藜蘆醇與HAuCl4的反應(yīng)對RRS、SOS和FDS光譜特征和強度的影響，考察了適宜的反應(yīng)條件，并以RRS為例考察了共存物質(zhì)的影響，表明方法有良好的選擇性。據(jù)此，利用白藜蘆醇與氯金酸的反應(yīng)發(fā)展了一種用共振光散射技術(shù)、靈敏度高、簡便、快速測定白藜蘆醇的新方法。方法用于虎杖中自藜蘆醇的測定，獲得了滿意的結(jié)果。 (6)白藜蘆醇—高錳酸鉀體系：分光光度法測定白藜蘆醇。 在pH1.8-2.5的