電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大體系的構(gòu)建及其高靈敏免疫分析方法.pdf

1、本文就環(huán)糊精類物質(zhì)對(duì)電化學(xué)發(fā)光物三聯(lián)吡啶釕及其通過靜電及微孔吸附作用與SiO2納米粒形成的納米復(fù)合物的電化學(xué)發(fā)光的增強(qiáng)作用、三聯(lián)吡啶釕摻雜SiO2納米粒的制備及在其表面包裹上Nafion與陰離子聚電解質(zhì)的混合膜而得到新的電化學(xué)發(fā)光納米復(fù)合物的制備與性能、Nafion與陰離子聚電解質(zhì)混合膜包裹三聯(lián)吡啶釕摻雜SiO2納米復(fù)合物在乙肝表面抗原(HBsAg)檢測(cè)中的應(yīng)用做了相關(guān)研究。同時(shí),根據(jù)本文的檢測(cè)要求設(shè)計(jì)并制做了新的檢測(cè)器件,并對(duì)其性能做

2、了相關(guān)考察。
　　首先,根據(jù)磁分離電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)測(cè)定的特殊要求設(shè)計(jì)并制做了能夠在實(shí)驗(yàn)室電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀器上進(jìn)行ECLIA測(cè)定的檢測(cè)器件I和II,對(duì)兩者檢測(cè)性能的研究發(fā)現(xiàn)檢測(cè)器件II更適合磁分離ECLIA的檢測(cè)要求。通過對(duì)三聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy)32+)及商品化試劑的檢測(cè)證明檢測(cè)器件II的電化學(xué)及電化學(xué)發(fā)光(ECL)檢測(cè)性能較好,因而選其作為本課題研究所需要的檢測(cè)器件進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
　　將環(huán)糊精類物質(zhì)β-

3、環(huán)糊精(β-CD)及羧甲基β-環(huán)糊精(CM-β-CD)加入到Ru(bpy)32+的ECL檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)其發(fā)光增強(qiáng),且CM-β-CD的增強(qiáng)作用強(qiáng)于β-CD。分別將β-CD及CM-β-CD與Ru(bpy)32+形成超分子包合物通過靜電及微孔吸附作用與SiO2納米粒形成納米復(fù)合物后,其ECL增強(qiáng),而β-CD的增強(qiáng)效果強(qiáng)于CM-β-CD。采用透射電子顯微鏡(TEM)、Zeta電位儀對(duì)SiO2納米粒的形態(tài)及性能進(jìn)行了表征。采用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀,電化學(xué)

4、檢測(cè)儀及Zeta電位儀對(duì)納米復(fù)合物的性能進(jìn)行了表征。
　　采用St?ber法制備了Ru(bpy)32+摻雜SiO2納米粒Ru@SiO2,其ECL良好。由于Nafion具有較強(qiáng)的成膜性能,將其與陰離子聚電解質(zhì)聚丙烯酸鈉(PAA-Na)混合成膜包裹于Ru@SiO2表面,形成了新的電化學(xué)發(fā)光納米復(fù)合物。通過電化學(xué)檢測(cè),ECL檢測(cè)及Zeta電位的檢測(cè)對(duì)其性能進(jìn)行了表征,結(jié)果表明Nafion與PAA-Na混合膜包裹的Ru@SiO2納米復(fù)合物

5、的ECL明顯強(qiáng)于純Nafion包裹的Ru@SiO2納米復(fù)合物。在此基礎(chǔ)上,將二抗通過與Nafion的疏水性結(jié)構(gòu)連接于混合膜包裹的Ru@SiO2納米復(fù)合物上再進(jìn)一步將Ru(bpy)32+通過離子交換及靜電吸附作用固定在此納米復(fù)合物的表面,即進(jìn)一步的增強(qiáng)了整個(gè)納米復(fù)合物的ECL。此納米復(fù)合物可作為檢測(cè)探針進(jìn)行免疫分析。
　　利用前文制備的Nafion與PAA-Na混合膜包裹Ru(bpy)32+摻雜SiO2納米復(fù)合物連接上二抗并進(jìn)一步吸