跨膜蛋白PSGL-1的跨膜區(qū)相互作用的分子機(jī)制研究.pdf

1、P-選擇素糖蛋白配體-1(PSGL-1)，是一種跨膜蛋白，它在白細(xì)胞內(nèi)以二聚體的形式表達(dá)。在炎癥反應(yīng)初期，PSGL-1可以通過與血小板以及內(nèi)皮細(xì)胞上的P-selection蛋白相互作用，進(jìn)而介導(dǎo)白細(xì)胞黏附過程。相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，通過PSGL-1跨膜區(qū)介導(dǎo)的二聚作用的對(duì)于實(shí)現(xiàn)其生化功能是必不可少的。目前，關(guān)于PSGL-1跨膜區(qū)相互作用的機(jī)制尚未可知。
　　在本論文中，我們采用TOXCAT體系，設(shè)計(jì)了7種不同序列長(zhǎng)度的跨膜區(qū)嵌合體，證

2、實(shí)了跨膜區(qū)序列長(zhǎng)度能夠影響跨膜蛋白的相互作用。包含320-343這24個(gè)氨基酸殘基序列的PSGL-WT跨膜螺旋二聚作用最強(qiáng)，選作后續(xù)研究的野生型菌種。PSGL-WT的同源二聚能力約為陽性對(duì)照GPA的1.5倍，這表明它是一個(gè)自身相互作用非常強(qiáng)的二聚體。然后，通過亮氨酸和丙氨酸全掃描突變研究PSGL-1跨膜區(qū)相互作用機(jī)制，結(jié)果綜合表明位于（abcdefg）n七肽重復(fù)序列的a面的I324，A331，T338以及d面的C320，L327，F(xiàn)33

3、4，L341氨基酸突變體會(huì)造成PSGL-1-TM二聚能力下降，初步認(rèn)定PSGL-1的跨膜區(qū)相互作用是由a，d面組成的亮氨酸拉鏈介導(dǎo)的。
　　隨后，分子動(dòng)力學(xué)模擬方法被用于驗(yàn)證TOXCAT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)進(jìn)一步確認(rèn)二聚體的相互作用接觸面。對(duì)野生型序列的粗粒化模擬中，我們得出了PSGL-WT二聚體兩個(gè)單體的主鏈之間的距離平穩(wěn)，距離約7.5(A);形成了一個(gè)右手螺旋構(gòu)象，出現(xiàn)-27°的二面角。另外，通過野生型和a，d面的突變型對(duì)比發(fā)現(xiàn)，二