牛分枝桿菌免疫優(yōu)勢(shì)抗原基因的克隆表達(dá)及納米疫苗初步研究.pdf

1、牛分枝桿菌免疫優(yōu)勢(shì)抗原基因的克隆表達(dá)及納米疫苗初步研究CloningandExpressingofImmunodominantAntigenGenesofMycobacter／umBovisandPreliminaryStudyOilnanovaccine課題來源：國(guó)家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào)：31160515)指導(dǎo)教師：王玉蛔教援申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別：理堂亟名方學(xué)業(yè)究在專研所摘要牛結(jié)核病(Bovinetuberculosis)是由牛分枝桿菌(

2、MycobacteriumBovis)所引起的慢性致死性人獸共患傳染病。它的流行與傳播不僅嚴(yán)重影響畜牧業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展，造成了巨額的經(jīng)濟(jì)損火，而且威脅到人類的健康。研究發(fā)現(xiàn)納米粒子具有緩釋性、穩(wěn)定性、靶向性和安全性等優(yōu)點(diǎn)，將為預(yù)防牛結(jié)核病納米疫苗的研發(fā)帶來希望。因此，本研究探討了制備預(yù)防牛結(jié)核病的新型納米疫苗，并對(duì)其免疫原性進(jìn)行初步研究。以牛分枝桿菌C68001株基因組DNA為模板，通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建免疫優(yōu)勢(shì)抗原CFPl0，ESAT6，

3、A985A和A985B的原核表達(dá)載體。首先對(duì)載體pET28aa985b進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)和純化，利用Westernblotting進(jìn)行鑒定。以明膠為載體材料包裹A985B蛋自制備納米疫苗，檢測(cè)其載藥率和包封率，并采用透射電鏡對(duì)納米顆粒進(jìn)行表征分析。以小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，分別從體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫三方面對(duì)制備的納米疫苗進(jìn)行初步的免疫原性的研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET28acJ白10、pET28aesat6、pET28

4、aa985a和pET28aa985b和相應(yīng)的重組基因工程菌株；(2)誘導(dǎo)表達(dá)和純化了重組蛋白A985B；(3)制備了以明膠為載體材料載免疫優(yōu)勢(shì)抗原蛋白A985B的納米疫苗，該疫苗穩(wěn)定性好，疫苗顆粒粒徑均一，平均粒徑在100n／／l左右；載藥率為7183％，包封率為4103％，達(dá)到了納米疫苗顆粒的。I_：藝要求；(4)載免疫優(yōu)勢(shì)抗原蛋白A985B的納米疫苗能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生較高的IgG抗體水平，提高了IFN)、IL2和黏膜slgA的表達(dá)量，且