麻瘋樹（Jatropha curcas）核糖體失活蛋白（curcin）的分離純化.pdf

1、植物核糖體失活蛋白(RIPs)是一種多活性的物質(zhì)，尤其是其特殊的抗腫瘤、抗生育、抗人體免疫缺陷病毒(HIV)、抗寄生蟲和殺菌、殺蟲等多種生物活性和其在植物抗病毒基因工程中的廣泛應(yīng)用預(yù)示著RIPs巨大的應(yīng)用前景。而目前關(guān)于麻瘋樹核糖體失活蛋白curcin的分離和各種生物活性研究的并不多，因此，本課題著重研究curcin蛋白的提取純化條件和生物活性。 本論文中測定了貴州省當(dāng)年生野生麻瘋樹種子中的總蛋白質(zhì)、總灰分和水分的含量分別為：2

2、4.17％、8.00％、4.40％。而且貴州省當(dāng)年生麻瘋樹種子中的總蛋白質(zhì)含量(24.17％)高于貯藏種子中總蛋白質(zhì)含量(13.98％)。 采用95％飽和度的硫酸銨鹽析和葡聚糖凝膠柱層析純化法從麻瘋樹種仁中分離純化出兩種蛋白質(zhì)。一種是麻瘋樹核糖體失活蛋白curcin(又稱麻瘋樹毒蛋白)，其相對(duì)分子量為29.10 kDa，等電點(diǎn)為8.70；另一種是分子量10 kDa的小分子蛋白質(zhì)。 設(shè)計(jì)了關(guān)于磷酸鹽緩沖溶液(PBS)濃度和

3、pH值、氯化鈉溶液濃度的正交實(shí)驗(yàn)方案。用以上不同的磷酸鹽緩沖溶液提取麻瘋樹種仁中的蛋白質(zhì)，電泳后用quantity one軟件分析，計(jì)算得到麻瘋樹毒蛋白curcin占種子質(zhì)量的百分比，以此篩選提取麻瘋樹毒蛋白粗提液的最佳條件。當(dāng)磷酸鹽緩沖溶液濃度為0.05mol/L，pH=6.80，氯化鈉溶液濃度是0.14 mol/L時(shí)，麻瘋樹種仁中毒蛋白有最高提取率0.103％。此外，還對(duì)麻瘋樹種仁粗蛋白的純化條件進(jìn)行了篩選。結(jié)果顯示，當(dāng)柱高為80