黑木耳核糖體失活蛋白的分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、核糖體失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一類廣泛存在于植物界中的毒蛋白，具有獨(dú)特的酶學(xué)機(jī)制和生物學(xué)功能。目前報(bào)道的RIP大多來自高等植物，在食用菌中也有一些發(fā)現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用多種蛋白質(zhì)純化技術(shù)，成功地從黑木耳菌絲體中分離得到RIP，并對(duì)其性質(zhì)和活性進(jìn)行鑒定。分別通過纖維素DE-52陰離子交換層析、Affi-gel blue親合層析、Sephadex G-75凝膠過濾層析三種層析方法逐步純化RI

2、P，在每步純化之后，用紫外測(cè)定法、SDS-PAGE電泳法和家兔網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解液體外翻譯等方法對(duì)所得蛋白的含量、分子量及對(duì)蛋白質(zhì)體外合成抑制活性進(jìn)行測(cè)定，將有抑制作用活性的目的蛋白混合物繼續(xù)純化，最終分離得到高純度的黑木耳核糖體失活蛋白G2。高效液相色譜檢測(cè)其純度達(dá)99.3％。然后對(duì)此RIP進(jìn)行RNA N-糖苷酶活性檢測(cè)和抑制蛋白質(zhì)體外翻譯合成活性檢測(cè)，二者均呈陽性反應(yīng)，從而證明G2為黑木耳核糖體失活蛋白，是一種新發(fā)現(xiàn)的蛋白，為真菌蛋白質(zhì)