香樟樹(shù)種子核糖體失活蛋白穩(wěn)定性的研究.pdf

1、核糖體失活蛋白( ribosome-inactivating protein,RIP)是一種具有RNA N-糖苷酶活性的蛋白質(zhì),廣泛存在于高等植物的根,葉和種子細(xì)胞中,在抗腫瘤、抗HIV和抗動(dòng)植物病毒方面有優(yōu)秀的表現(xiàn)。香樟樹(shù)(Cinnamomum camphora)的種子含有大量的核糖體失活蛋白,并且香樟樹(shù)在我國(guó)的分布也很廣泛,可是目前對(duì)其種子的利用并不是很充分,這既是是對(duì)資源材料的浪費(fèi),又是對(duì)環(huán)境的污染。
　　本文以香樟樹(shù)的種子

2、作為研究對(duì)象,用丙酮和硫酸銨對(duì)蛋白質(zhì)沉淀、配位親和層析的方法對(duì)香樟的種子核糖體失活蛋白進(jìn)行分離純化。通過(guò)與肝癌細(xì)胞作用后,對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行研究,用MgCl2和蛋白酶抑制劑對(duì)其處理,再用SDS-PAGE電泳對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行分析,以期了解核糖體失活蛋白的性質(zhì)和香樟種子中兩種RIP之間的相互轉(zhuǎn)化關(guān)系與條件,主要的研究結(jié)果如下:
　　(一)確定了一種較為快速便捷的香樟的種子核糖體失活蛋白的提取工藝,通過(guò)電泳鑒定和與癌細(xì)胞的作用能肯定本實(shí)驗(yàn)所提取的

3、蛋白質(zhì)為核糖體失活蛋白。
　　(二)在提取過(guò)程中的除去油脂和其它雜質(zhì)方面,用丙酮對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行沉淀濃縮要比用硫酸銨進(jìn)行沉淀濃縮效果要好,而且用時(shí)要少,但是弊端是蛋白質(zhì)失活較明顯。所以,在提純核糖體失活蛋白方面可以用硫酸銨進(jìn)行沉淀濃縮;而用不同條件進(jìn)行處理時(shí)可以用丙酮進(jìn)行沉淀濃縮。
　　(三)與自然條件下香樟果實(shí)核糖體失活蛋白的降解趨勢(shì)相比, MaCl2和EDTA-PMSF處理后的降解趨勢(shì)要明顯的不同。其中MgCl2處理過(guò)的粗提