生物學(xué)實驗中常用試劑對抗原抗體反應(yīng)影響及可能造成的實驗信息丟失和錯誤的定量分析.pdf

1、目的：
　　對生物學(xué)實驗Western Blot中常用試劑SDS及免疫組織化學(xué)技術(shù)組織前處理過程和乙醇對抗原、抗體活性及DNA影響進行定量分析，間接反映其對抗原抗體反應(yīng)可能造成的實驗信息的丟失和錯誤，并試圖尋找替代試劑。
　　方法：
　　1、采用雙向免疫擴散實驗，通過觀察沉淀線及確定抗原效價定量分析SDS處理血清后對血清抗原的影響。
　　2、采用免疫散射比濁技術(shù)，定量分析SDS處理血清后對IgA、IgM、IgG抗

2、原的影響。
　　3、采用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，定量分析SDS處理乙肝表面抗原陽性血清后對乙肝表面抗原的影響。
　　4、采用免疫固定電泳技術(shù)，分析SDS處理血清后對免疫球蛋白抗原結(jié)構(gòu)的影響。
　　5、采用凝集實驗，通過比較凝集效價及凝集強度定量分析免疫組織化學(xué)組織前處理過程和所應(yīng)用試劑處理顆粒型抗原后對顆粒型抗原的影響。
　　6、采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，定量分析SDS及乙醇處理乙肝表面抗體陽性血清后對乙肝表面抗體的影響；定

3、量分析SDS對不同類型患者傷寒及卵清抗體的影響有無差異。
　　7、采用熒光定量PCR技術(shù)，將DNA模板經(jīng)SDS及乙醇處理，通過對GAPDH及CRP基因的擴增，比較Ct值，計算實驗組與對照組Ct值之差，即△Ct值，及抑制率，定量分析SDS及乙醇對DNA的影響。
　　8、通過酶聯(lián)免疫吸附試驗及熒光定量PCR技術(shù)測定SDS及十二烷基麥芽糖苷（DDM）對乙肝表面抗體及DNA的影響，并進行比較，探討DDM在蛋白質(zhì)提取時，對SDS的替代

4、作用。
　　結(jié)果：
　　1、雙向免疫擴散實驗結(jié)果顯示：對照組抗原效價為1:256，SDS37℃實驗組抗原效價為1:4，SDS100℃實驗組抗原已破壞，結(jié)果無沉淀線產(chǎn)生。
　　2、免疫散射比濁實驗結(jié)果顯示：SDS37℃實驗組IgA、IgM、IgG較對照組略有上升，SDS100℃實驗組IgA、IgG抑制率在90%以上，IgM為30%。
　　3、電化學(xué)發(fā)光實驗結(jié)果顯示：SDS37℃實驗組乙肝表面抗原抑制率為70%，SD

5、S100℃實驗組為96%。
　　4、免疫固定電泳技術(shù)結(jié)果顯示：經(jīng)SDS處理后，免疫球蛋白抗原結(jié)構(gòu)被破壞。
　　5、凝集實驗結(jié)果顯示：免疫組織化學(xué)技術(shù)組織前處理過程對抗原的抑制率為72.2%。各試劑單獨處理抗原與對照組相比結(jié)果為：75%以上的高濃度乙醇對抗原活性的抑制率約為70%，甲醛抑制率約為20%，二甲苯約為10%。
　　6、酶聯(lián)免疫吸附試驗結(jié)果顯示：SDS對乙肝表面抗體的半數(shù)抑制濃度為0.92%(32mmol/L)

6、；30%乙醇對HBsAb無明顯抑制作用；0.1%SDS對傷寒抗體及卵清抗體具有一定的抑制作用，但是在對ICU患者與健康體檢者及不同年齡組健康體檢者之間對這兩種抗體的抑制作用無明顯差異。
　　7、熒光定量PCR技術(shù)結(jié)果顯示：SDS及乙醇處理DNA模板后，GAPDH及CRP擴增的Ct值隨SDS及乙醇濃度的增加而增加，0.05%(1.74mmol/L) SDS處理后，無擴增曲線。
　　8、SDS及DDM對乙肝表面抗體的半數(shù)抑制濃度