江西省野生建蘭的ISSR遺傳多樣性研究.pdf

1、本研究主要以江西省建蘭[Cymbidiumensifolium(Linn.)Sw]為材料,采用ISSR分子標記進行遺傳多樣性分析,目的是了解江西省建蘭的遺傳多樣性水平、遺傳結(jié)構(gòu)及其遺傳分化,為江西省建蘭資源的保護與開發(fā)利用提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下:
　　 建蘭ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系:25μl的PCR反應(yīng)體積中,1*PCRbuffer,2.5mmol/LMgCl2,200ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.2

2、5UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物。最佳擴增程序為:94℃預(yù)變性5min,40個循環(huán):94℃變性45S,復(fù)性45s,72℃延伸60s,循環(huán)結(jié)束后72℃延伸7min,4℃保存。
　　 用16條篩選出的引物進行PCR擴增,共得到137條譜帶,其中多樣性條帶為131條,多態(tài)性條帶百分率為96.19％。POPGENE軟件分析結(jié)果顯示,建蘭物種水平上遺傳多樣性為(PPF=76.21%,Na=1.7621,Ne=1.4763,H

3、pop=0.2730,I=0.4052),居群水平遺傳多樣性為(PPF=100.00%,Na=2.0000,Ne=1.6696,Hpop=0.3787,I=0.5564)。其中崇義(CY)居群的遺傳多樣性最高(Hpop=0.3280),尋烏(XW)居群的遺傳多樣性最低(Hpop=0.2082)。
　　 WINAMOVA軟件分析顯示,建蘭居群間的遺傳分化系數(shù)ΦST值為0.1557,表明江西建蘭居群內(nèi)的遺傳變異大于居群間的遺傳變異。

4、并且大庾嶺和九連山脈居群間ΦST=0.1752>九嶺山脈居群間ΦST=0.1650>武夷山脈居群間ΦST=0.1616>羅霄山脈居群間ΦST=0.1088,即各山脈居群的居群內(nèi)遺傳分化均大于居群間的遺傳分化。
　　 POPGENE軟件計算建蘭居群的Nei’S遺傳距離(D)和遺傳一致度(I)顯示,17個建蘭居群兩兩之間的遺傳距離(D)和遺傳一致度(I)變化范圍分別為0.0749-0.2819和0.7543-0.9278。其中井岡山

5、市(JGSS)和龍南(LN)的遺傳距離(D=0.0749)最小;黎川(LC)和宜豐(YF)的遺傳距離(D=0.2819)最大。NTSYS-pc軟件對Nei’S遺傳距離進行UPGMA聚類,MVSP軟件對建蘭居群進行主成分分析(PCA),結(jié)果顯示,井岡山市(JGSS)、龍南(LN)、崇義(CY)、寧都(ND)、南豐(NF)居群聚類,萬載(WZ)、宜豐(YF)、安福(AF)、邵武(SW)、武夷山市(WYSS)、資溪(ZX)居群聚類,再與尋烏(

6、XW)居群聚合聚類,貴溪(GX)、石城(SC)居群聚類,安遠(AY)、銅鼓(TG)居群聚類,最后均與黎川(LC)居群所得聚合聚類。
　　 TFPGA軟件對17個建蘭居群的遺傳距離和地理距離進行Mantel統(tǒng)計分析,并做顯著性檢驗,結(jié)果顯示,遺傳距離和地理距離之間r=0.0907,p=0.8240>0.05,表明17個建蘭居群遺傳距離和地理距離相關(guān)性不顯著。
　　 根據(jù)研究結(jié)果和實地考察提出江西建蘭相應(yīng)的保護策略,如:遷地