人工合成CrylBa3基因及轉(zhuǎn)化水稻研究.pdf

1、Bt是一種可以形成芽胞的革蘭氏陽(yáng)性菌,它的伴孢晶體蛋白對(duì)多種屬的昆蟲有毒殺作用,各個(gè)伴孢晶體蛋白殺蟲譜專一。CryIBa3基因?qū)[翅目昆蟲具有專一的殺蟲功效。CryIBa3基因由1228位氨基酸殘基組成,其核心區(qū)域位于22-655位氨基酸殘基之間。本研究根據(jù)CryIBa3基因的原始序列,利用玉米密碼子偏好性改造合成了CryIBa3基因。采用農(nóng)桿菌侵染法將CryIBa3基因全長(zhǎng)片段及其核心區(qū)域片段轉(zhuǎn)化到水稻中,通過組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)化種子T0

2、代,再經(jīng)遺傳轉(zhuǎn)化檢測(cè),獲得了T1代的檢測(cè)結(jié)果。主要研究結(jié)果如下:
　　1)依據(jù)玉米密碼子偏好性對(duì)CryIBa3基因序列進(jìn)行密碼子改造。使其GC含量達(dá)到了56.58％,合成基因蛋白質(zhì)序列與原基因一致,其DNA序列差異率達(dá)19%。
　　2)構(gòu)建了全長(zhǎng)LCryIBa3與核心區(qū)域片段SCryIBa3兩個(gè)植物表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻獲得13個(gè)T0帶PCR陽(yáng)性植株,經(jīng)篩選檢測(cè)得到8個(gè)T1代轉(zhuǎn)基因植株。
　　3)對(duì)T1代轉(zhuǎn)基

3、因株分蘗期和抽穗期葉子中Bt毒蛋白含量的測(cè)定,結(jié)果顯示:分蘗期的Bt含量在630ng/g左右,抽穗期的Bt含量在710ng/g左右,明顯高于分蘗期。這說明Bt毒蛋白的含量隨生育時(shí)期的不同而表現(xiàn)出時(shí)空差異。
　　4)對(duì)T1代轉(zhuǎn)基因株抽穗期葉子和穗子中Bt毒蛋白含量的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)葉子中的Bt含量710ng/g高于穗子中的650ng/g。這說明Bt基因在植株體內(nèi)的表達(dá)含量隨著組織的不同而不同。
　　5)對(duì)T1代轉(zhuǎn)基因株含有CryIB