簡(jiǎn)介：臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)練習(xí)題及答案練習(xí)題及答案一名詞解釋1、基因能夠表達(dá)和產(chǎn)生蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列是決定遺傳性狀的功能單位2、端粒以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒該結(jié)構(gòu)是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的一種復(fù)合體僅在真核細(xì)胞染色體末端存在3、啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列4、增強(qiáng)子位于真核基因中遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)能明顯增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄效率的特殊DNA序列它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄基因的上游或下游也可相距靶基因較遠(yuǎn)5、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯等一系列過(guò)程合成特定的蛋白質(zhì)進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過(guò)程6、信息分子調(diào)節(jié)細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)其中由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞間信息分子而在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)信息分子7、受體是存在于靶細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合進(jìn)而發(fā)生生物學(xué)效應(yīng)的的特殊蛋白質(zhì)8、分子克隆在體外對(duì)DNA分子按照即定目的和方案進(jìn)行人工重組將重組分子導(dǎo)入合適宿主使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖以獲得該DNA分子的大量拷貝9、載體能在連接酶的作用下和外源DN段連接并運(yùn)送DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子當(dāng)促使變性的因素解除后兩條DNA鏈又可以通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)21、退火指將溫度降至引物的TM值左右或以下引物與DNA摸板互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成雜交鏈22、定量PCR基因表達(dá)涉及的轉(zhuǎn)錄水平的研究常需要對(duì)MRNA進(jìn)行定量測(cè)定對(duì)此采用的PCR技術(shù)就叫定量PCR23、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯等一系列過(guò)程合成特定的蛋白質(zhì)進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過(guò)程24、基因治療一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法25、管家基因在生物體生命的全過(guò)程都是必須的且在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因26、SD序列轉(zhuǎn)錄出的MRNA要進(jìn)入核糖體上進(jìn)行翻譯需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌16SRRNA3末端富含嘧啶的序列互補(bǔ)是核糖體的識(shí)別位點(diǎn)27、核酸探針探針是指能與某種大分子發(fā)生特異性相互作用并在相互作用之后可以檢測(cè)出來(lái)的生物大分子核酸探針是指能識(shí)別特異堿基順序的帶有標(biāo)記的一段DNA或RNA分子28、周期蛋白是一類呈細(xì)胞周期特異性或時(shí)相性表達(dá)累積與分解的蛋白質(zhì)它與周期素依賴性激酶共同影響細(xì)胞周期的運(yùn)行二問(wèn)答題1、影響DNA穩(wěn)定性的因素有哪些

簡(jiǎn)介：細(xì)胞學(xué)說(shuō)細(xì)胞學(xué)說(shuō)的建立及其意義德國(guó)植物學(xué)家施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺共同提出一切植物、動(dòng)物都是由細(xì)胞組成的，細(xì)胞是一切動(dòng)植物的基本單位。經(jīng)典遺傳學(xué)兩條基本規(guī)律統(tǒng)一律當(dāng)兩種不同植物雜交時(shí)，它們的下一代可能與親本之一完全相同；分離規(guī)律將不同植物品種雜交后的F1代種子再進(jìn)行雜交或自交時(shí)，下一代就會(huì)按照一定的比例分離，因而具有不同的形式。1865年發(fā)表植物雜交試驗(yàn)，直到1900年才被人們重新發(fā)現(xiàn)。孟德?tīng)柋还J(rèn)為經(jīng)典遺傳學(xué)的奠基人?，F(xiàn)代遺傳學(xué)MGAN及其助手第一次將代表某一特性的基因同染色體聯(lián)系起來(lái)，使科學(xué)界普遍認(rèn)識(shí)了染色體的重要性并接受了孟德?tīng)柕倪z傳學(xué)原理。MGAN特別指出種質(zhì)必須由某些獨(dú)立的要素組成，我們把這些要素稱為遺傳因子或基因。第二節(jié)分子生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史準(zhǔn)備和醞釀階段（19世紀(jì)后期到20世紀(jì)50年代初）對(duì)生命本質(zhì)的認(rèn)識(shí)上的兩點(diǎn)重大突破1確定了蛋白質(zhì)是生命的主要基礎(chǔ)物質(zhì)2確定了生物遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)是DNA現(xiàn)代分子生物學(xué)的建立和發(fā)展階段（20世紀(jì)50年代初到70年代初）這一階段以1953年WATSON和CRICK提出的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型作為現(xiàn)代分子生物學(xué)誕生的里程碑開(kāi)創(chuàng)了分子遺傳學(xué)基本理論建立和發(fā)展的黃金時(shí)代。在此期間的主要進(jìn)展包括遺傳信息傳遞中心法則的建立

簡(jiǎn)介：蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)是指多肽鏈的主鏈骨架中若干肽單位，各自沿一定的軸盤旋或折疊，并以氫鍵為次級(jí)鍵而形成有規(guī)則的構(gòu)象，如Α螺旋Β折疊Β轉(zhuǎn)角等。肽單位肽鍵是構(gòu)成在分子的基本化學(xué)鍵，肽鍵與相鄰的原子所組成的基團(tuán)，成為肽單位或肽平面。結(jié)構(gòu)域是位于超二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)間的一個(gè)層次。結(jié)構(gòu)域是在蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)內(nèi)的獨(dú)立折疊單元，其通常都是幾個(gè)超二級(jí)結(jié)構(gòu)單元的組合。在較大的蛋白質(zhì)分子中，由于多肽鏈上相鄰的超二級(jí)結(jié)構(gòu)緊密聯(lián)系，進(jìn)一步折疊形成一個(gè)或多個(gè)相對(duì)獨(dú)立的致密的三維實(shí)體，即結(jié)構(gòu)域。超二級(jí)結(jié)構(gòu)又稱模塊或膜序是指在多肽內(nèi)順序上相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼此相互作用，形成有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)聚集體。三級(jí)結(jié)構(gòu)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)、超二級(jí)結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)域的一條多肽鏈，由于其序列上相隔較遠(yuǎn)的氨基酸殘基側(cè)鏈的相互作用，而進(jìn)行范圍更廣泛的盤曲與折疊，形成包括主、測(cè)鏈在內(nèi)的空間排列，這種在一條多肽鏈中所有原子和基團(tuán)在三維空間的整體排布稱為三級(jí)結(jié)構(gòu)。一級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序，以及二硫鍵的位置。四級(jí)結(jié)構(gòu)多亞基蛋白質(zhì)分子中各個(gè)具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈，以適當(dāng)?shù)姆绞骄酆纤纬傻牡鞍踪|(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。增色效應(yīng)增色效應(yīng)或高色效應(yīng)。由于DNA變性引起的光吸收增加稱增色效應(yīng)也就是變性后DNA溶液的紫外吸收作用增強(qiáng)的效應(yīng)。固定化酶不溶于水的酶。是用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。脂肪酸的Β氧化飽和脂肪酸在一系列酶的作用下，羧基端的Β位C原子發(fā)生氧化，C鏈在Α位C原子與Β位C原子間發(fā)生斷裂，每次生成一個(gè)乙酰COA和較原來(lái)少兩個(gè)C單位的脂肪酸，這個(gè)不斷重復(fù)進(jìn)行的脂肪酸氧化過(guò)程稱為脂肪酸的Β氧化。脂肪酸的Β氧化基本過(guò)程丁酰COA經(jīng)最后一次Β氧化生成2分子乙酰COA。故每次Β氧化1分子脂酰COA生成1分子FADH２，1分子NADHH，1分子乙酰COA，通過(guò)呼吸鏈氧化前者生成2分子ATP，后者生成3分子ATP。尿素循環(huán)肝臟是動(dòng)物生成尿素的主要器官，由于精氨酸酶的作用使精氨酸水解為鳥氨酸及尿素。精氨酸在釋放了尿素后產(chǎn)生的鳥氨酸，和氨甲酰磷酸反應(yīng)產(chǎn)生瓜氨酸，瓜氨酸又和天冬氨酸反應(yīng)生成精氨基琥珀酸，精氨基琥珀酸為酶裂解，產(chǎn)物為精氨酸及延胡索酸。由于精氨酸水解在尿素生成后又重新反復(fù)生成，故稱尿素循環(huán)。操縱子指啟動(dòng)基因、終止基因和一系列緊密連鎖的結(jié)構(gòu)基因的總稱。原核生物大多數(shù)基因表達(dá)調(diào)控是通過(guò)操縱子機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。操縱子通常由2個(gè)以上的編碼序列與啟動(dòng)序列、操縱序列以及其他調(diào)節(jié)序列在基因組中成簇串聯(lián)組成。啟動(dòng)序列是RNA聚合酶結(jié)合并起動(dòng)轉(zhuǎn)錄的特異DNA序列。多種原核基因啟動(dòng)序列特定區(qū)域內(nèi)，通常在轉(zhuǎn)錄起始錯(cuò)誤⑥密碼子閱讀與翻譯具有一定的方向性從5端到3端⑦有起始密碼子和終止密碼子，起始密碼子有兩種，一種是甲硫氨酸（AUG），一種是纈氨酸（GUG），而終止密碼子（有3個(gè)，分別是UAA、UAG、UGA）沒(méi)有相應(yīng)的轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸（TRNA）存在，只供釋放因子識(shí)別來(lái)事先翻譯的終止。在信使RNA中，堿基代碼A代表腺嘌呤，G代表鳥嘌呤，C代表胞嘧啶，U代表尿嘧啶一碳單位就是指具有一個(gè)碳原子的基團(tuán)。指某些氨基酸分解代謝過(guò)程中產(chǎn)生含有一個(gè)碳原子的基團(tuán)，包括甲基、亞甲基、甲烯基、甲炔基、甲酚基及亞氨甲基等。一碳單位具有以下下兩個(gè)特點(diǎn)１不能在生物體內(nèi)以游離形式存在；２必須以四氫葉酸為載體。能生成一碳單位的氨基酸有絲氨酸、色氨酸、組氨酸、甘氨酸。另外蛋氨酸（甲硫氨酸）可通過(guò)S腺苷甲硫氨酸（SAM提供“活性甲基”（一碳單位），因此蛋氨酸也可生成一碳單位。遺傳基因組學(xué)是將微陣列技術(shù)和數(shù)量性狀座位分析結(jié)合起來(lái)，全基因組水平上定位基因表達(dá)的QTL它為研究復(fù)雜性狀的分子機(jī)理和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供全新的手段氧化磷酸化是物質(zhì)在體內(nèi)氧化時(shí)釋放的能量供給ADP與無(wú)機(jī)磷合成ATP的偶聯(lián)反應(yīng)。主要在線粒體中進(jìn)行。在真核細(xì)胞的線粒體或細(xì)菌中，物質(zhì)在體內(nèi)氧化時(shí)釋放的能量供給ADP與無(wú)機(jī)磷合成ATP的偶聯(lián)反應(yīng)。酶的活性中心酶分子中氨基酸殘基的側(cè)鏈有不同的化學(xué)組成。其中一些與酶的活性密切相關(guān)的化學(xué)基團(tuán)稱作酶的必需基團(tuán)。這些必需基團(tuán)在一級(jí)結(jié)構(gòu)上可能相距很遠(yuǎn)，但在空間結(jié)構(gòu)上彼此靠近，組成具有特定空間結(jié)構(gòu)的區(qū)域，能和底物特異結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。這一區(qū)域稱為酶的活性中心或活性部位酶的活性單位酶的活性單位指在一定的作用條件下，酶促反應(yīng)中單位時(shí)間內(nèi)作用物的消耗量或產(chǎn)物的生成量。粘多糖粘多糖是含氮的不均一多糖，是構(gòu)成細(xì)胞間結(jié)締組織的主要成分，也廣泛存在于哺乳動(dòng)物各種細(xì)胞內(nèi)。化學(xué)組成為糖醛酸和酪氨基己糖交替出現(xiàn)，有時(shí)含硫鍵。也稱為糖胺聚糖。重要的粘多糖有硫酸皮膚素，硫酸類肝素，硫酸角質(zhì)素，硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸等固定化酶不溶于水的酶。是用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。必需脂肪酸維持哺乳動(dòng)物正常生長(zhǎng)所必需的，而動(dòng)物又不能合成的脂肪酸，如亞油酸，亞麻酸。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)在某一PH的溶液中，氨基酸解離成陽(yáng)離子和陰離子的趨勢(shì)及程度相等，所帶凈電荷為零，呈電中性，此時(shí)溶液的PH稱為該氨基酸的等電點(diǎn)。乳糖操縱子大腸桿菌中控制Β半乳糖苷酶誘導(dǎo)合成的操縱子。包括調(diào)控元件P啟動(dòng)子和O操縱基因，以及結(jié)構(gòu)基因LACZ、LACY和LACA。在沒(méi)有誘導(dǎo)物時(shí)，調(diào)節(jié)基因LACI編碼阻遏蛋白，與操縱基因O結(jié)合后抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄；乳糖的存在可與LAC阻遏蛋白結(jié)合誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，以代謝乳糖

簡(jiǎn)介：蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能習(xí)題蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能習(xí)題1欲獲得不變性的蛋白質(zhì)制劑，可采用下述哪種分離方法DA生物堿試劑沉淀B重金屬鹽沉淀C常溫乙醇沉淀D低溫鹽析E加熱2構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的基本單位是AALΑ氨基酸BDΑ氨基酸E核苷酸3維持蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的鍵是DA氫鍵B鹽鍵C疏水鍵D肽鍵E35磷酸二酯鍵4各種蛋白質(zhì)含氮量很接近，平均為DA24B55C16D625E305蛋白質(zhì)變性時(shí)不應(yīng)出現(xiàn)的變化是EA蛋白質(zhì)的溶解度降低B失去原有的生理功能C蛋白的天然構(gòu)象破壞D蛋白質(zhì)分子中各種次級(jí)鍵被破壞E蛋白質(zhì)分子個(gè)別肽鍵被破壞6測(cè)得某一蛋白質(zhì)樣品的含氮量為040G，此樣品約含蛋白質(zhì)多少BA200GB250GC640GD300G7下列含有兩個(gè)羧基的氨基酸是EA精氨酸B賴氨酸C甘氨酸D色氨酸E谷氨酸8維持蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要化學(xué)鍵是DA鹽鍵B硫水鍵C肽鍵D氫鍵E二硫鍵9關(guān)于蛋白質(zhì)分子三級(jí)結(jié)構(gòu)的描述，其中錯(cuò)誤的是BA天然蛋白質(zhì)分子均有這種結(jié)構(gòu)B具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈都具有生物學(xué)活性C三級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性主要是次級(jí)鍵維持D親水基團(tuán)聚集在三級(jí)結(jié)構(gòu)的表面E決定盤曲折疊的因素是氨基酸殘基10具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)特征是EA分子中必定含有輔基B在兩條或兩條以上具有三級(jí)結(jié)構(gòu)多肽鏈的基礎(chǔ)上，肽鏈進(jìn)一步折疊，盤曲形成C每條多肽鏈都具有獨(dú)立的生物學(xué)活性D依賴肽鍵維持四級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性E由兩條或兩條以上具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈組成11蛋白質(zhì)所形成的膠體顆粒，在下列哪種條件下不穩(wěn)定CA溶液PH值大于PIB溶液PH值小于PIC溶液PH值等于PID溶液PH值等于74E在水溶液中12蛋白質(zhì)變性是由于DA氨基酸排列順序的改變B氨基酸組成的改變C肽鍵斷裂D蛋白質(zhì)空間構(gòu)象的破壞E蛋白質(zhì)的水解13變性蛋白質(zhì)的主要特點(diǎn)是DA粘度下降B溶解度增加C不易被蛋白酶水解的C谷胱甘肽是體內(nèi)重要的氧化劑D谷胱甘肽的C端羧基是主要的功能基團(tuán)E谷胱甘肽所含的肽鍵均為肽鍵26血紅蛋白BA是含有鐵卟啉的單亞基珠蛋白B血紅蛋白的氧解離曲線為S型C一個(gè)血紅蛋白可與一個(gè)氧分子可逆結(jié)合D血紅蛋白不屬于變構(gòu)蛋白E血紅蛋白的功能與肌紅蛋白相同27蛋白質(zhì)螺旋的特點(diǎn)是CA多為左手螺旋B螺旋方向與長(zhǎng)鈾垂直C氨基酸側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)D肽鍵平面充分伸展E靠鹽鍵維系穩(wěn)定28蛋白質(zhì)分子中的無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)屬于AA二級(jí)結(jié)構(gòu)B三級(jí)結(jié)構(gòu)C四級(jí)結(jié)構(gòu)D結(jié)構(gòu)域E以上都不是29常出現(xiàn)在肽鏈轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)中的氨基酸為AA脯氨酸B半胱氨酸C谷氨酸D甘氨酸E丙氨酸30蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象主要取決于AA肽鏈氨基酸的排列序順B螺旋和折疊C肽鏈中的氨基酸側(cè)鏈D肽鏈中的肽鍵E肽鏈中的二硫鍵位置31鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的原理是AA中和電荷，破壞水化膜B鹽與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性蛋白鹽C降低蛋白質(zhì)溶液的介電常數(shù)D調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)E以上都不是32血清清蛋白PI為47在下列哪種PH值溶液中帶正電荷AAPH40BPH50CPH60DPH70EPH8033蛋白質(zhì)分子中引起280NM光吸引的最主要成分是CA酪氨酸的酚基B苯丙氨酸的苯環(huán)C色氨酸的吲哚環(huán)D肽鍵E半胱氨酸的SH基34下列蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠過(guò)濾層析柱時(shí)，最先被洗脫的是AA馬肝過(guò)氧化氫酶分子量247500B肌紅蛋白分子量16900C血清清蛋白分子量68500D牛乳球蛋白分子量35000E牛胰島素分子量570035蛋白質(zhì)變性過(guò)程中與下列哪項(xiàng)無(wú)關(guān)DA理化因素致使氫鍵破壞B疏水作用破壞C蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)破壞D蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)破壞，分子量變小E蛋白質(zhì)的功能喪失36血紅蛋白的氧合動(dòng)力學(xué)曲線呈S形，這是由于BA氧分子可氧化FE2，使之變?yōu)镕E3B一個(gè)亞基氧合后構(gòu)象變化，引起其余亞基氧合能力增強(qiáng)C有利于血紅蛋白執(zhí)行輸氧功能的發(fā)揮D血紅蛋白與氧的親和力高E氧分子直接與血紅蛋白結(jié)合37蛋白質(zhì)中多肽鏈形成螺旋時(shí)，主要靠哪種次級(jí)鍵維持CA疏水鍵B肽鍵C氫鍵D二硫鍵E范德華引力38有關(guān)亞基的描述，哪一項(xiàng)不恰當(dāng)BA每種亞基都有各自的三維結(jié)構(gòu)

簡(jiǎn)介：分子生物學(xué)進(jìn)展主要授課內(nèi)容及思考題分子生物學(xué)進(jìn)展主要授課內(nèi)容及思考題專題一細(xì)胞周期及其調(diào)控問(wèn)答題CYCLINCDK及CKI在細(xì)胞周期進(jìn)程中是如何發(fā)揮作用的專題二細(xì)胞凋亡問(wèn)答題試述細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制專題三癌及抗癌問(wèn)答題試述原癌基因活化機(jī)制及抗癌基因的作用參考書來(lái)茂德主編醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)，人民衛(wèi)生出版社1999（衛(wèi)生部規(guī)劃教材，研究生教材）專題四糖生物學(xué)一概述研究歷史研究?jī)?nèi)容及發(fā)展與醫(yī)學(xué)的關(guān)系二復(fù)合糖類1蛋白聚糖組成與結(jié)構(gòu)生理功能病理時(shí)的變化2糖蛋白組成糖鏈與蛋白的連接方式糖化過(guò)程及特點(diǎn)生物功能研究寡糖鏈的常用方法與疾病的聯(lián)系糖生物學(xué)糖生物學(xué)GLYCOBIOLOGY糖復(fù)合物GLYCOCONJUGATE糖類與蛋白或脂類形成共價(jià)結(jié)合物。一研究歷史研究歷史5060年代以前，其研究?jī)H限于（寡多）糖的化學(xué)組成和一般結(jié)構(gòu)測(cè)定，基本屬于有機(jī)化學(xué)范疇。70年代后，研究逐漸活躍，至80年代中、后期到90年代初，飛速發(fā)展，發(fā)現(xiàn)糖類在生物體中不僅是能源及結(jié)構(gòu)成份，而且擔(dān)負(fù)極為重要的生物學(xué)功能?，F(xiàn)認(rèn)為，糖復(fù)合物中的糖鏈?zhǔn)巧茖W(xué)中肽鏈、核苷酸鏈之外具有重大生物意義的第三鏈，其研究已成為繼蛋白、核酸之后探索生命奧秘的第三里程碑。具有相同殘基數(shù)的寡糖與肽和寡核苷酸相比更為復(fù)雜，包含有更多信息（例如4肽有數(shù)十種異構(gòu)體，4糖基理論上有三萬(wàn)種異構(gòu)體）。越多的事實(shí)證明，糖復(fù)合物中的寡糖是體內(nèi)重要的信息分子，在分子識(shí)別中起舉足輕重的作用，形成一新興學(xué)科。二二研究?jī)?nèi)容研究?jī)?nèi)容硫酸皮膚素DERMATINSULFATEDS硫酸角質(zhì)素KERATANSULFATEKS硫酸乙酰肝素HEPARANSULFATEHS肝素HEPARANHEP（一）（一）蛋白聚糖的結(jié)構(gòu)蛋白聚糖的結(jié)構(gòu)1GAG（1）HA葡萄糖醛酸乙酰氨基葡萄糖GLCUAGLCNAC結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的GAG，|Β1→3|Β1，4不含硫酸，HA分子量大，可達(dá)1000萬(wàn)（2萬(wàn)5千個(gè)重復(fù)二糖）。生理溶液中，為多聚陰離子，COOH分子相當(dāng)剛硬，呈無(wú)規(guī)扭曲團(tuán)狀。分子間可交織形成網(wǎng)絡(luò)。一些蛋白可以特異地非共價(jià)作用與HA結(jié)合。（2）CS及DSCS葡萄糖醛酸乙酰氨基半乳糖GLCUAGALNADS艾杜糖醛酸乙酰氨基半乳糖IDOUAGALNACS單個(gè)糖鏈分子量小于10萬(wàn)（250個(gè)重復(fù)二糖），DS實(shí)際上是CS的一種修飾形式。（由酶催化使D葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)艾杜糖醛酸）（3）KS半乳糖乙酰氨基葡萄糖GALGLCNAC單個(gè)KS很少大于4萬(wàn)（80個(gè)重復(fù)二糖），無(wú)糖醛酸。（4）HS及HEP2核心蛋白與GAG共價(jià)結(jié)合的蛋白。A絲甘蛋白聚糖核心蛋白最小的GAG，存于造血細(xì)胞及肥大細(xì)胞。B飾膠蛋白聚糖可修飾膠原蛋白，MW36萬(wàn)的核心蛋白，調(diào)節(jié)結(jié)締組織形成。C粘結(jié)蛋白聚糖32萬(wàn)的核心蛋白，其細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域可連接GAG鏈。D可聚蛋白聚糖核心蛋白225萬(wàn)25萬(wàn)，為軟骨中主要結(jié)構(gòu)大分子。除HA外，所有GAG均是以共價(jià)連接在核心蛋白上，寡糖分布在核心蛋白的不同區(qū)域，形狀似“瓶刷”。（二）蛋白聚糖的生理功能（二）蛋白聚糖的生理功能蛋白聚糖主要為結(jié)構(gòu)成分，分布于軟骨、結(jié)締組織、角膜等基質(zhì)內(nèi)，其密集的負(fù)電荷可以吸入大量水分子，構(gòu)成凝膠，起機(jī)械保護(hù)作用，“篩子”阻止細(xì)菌。其次為關(guān)節(jié)的潤(rùn)滑液、眼的玻璃體和粘液，起潤(rùn)滑作用，故以前稱為粘蛋白。正常動(dòng)脈壁含豐富的透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、肝素，以蛋白多糖的形式覆蓋于內(nèi)皮及平滑肌細(xì)胞表面，填充間質(zhì)，維持血管結(jié)構(gòu)通透性、彈性。硫酸肝素可嵌入細(xì)胞質(zhì)膜的核心蛋白，連于膜表面，在細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞通訊、細(xì)胞與環(huán)境的識(shí)別中起作用。1HA2可聚蛋白聚糖3多能蛋白聚糖4飾膠蛋白聚糖5纖調(diào)蛋白聚糖和光蛋白聚糖6基底膜蛋白聚糖7細(xì)胞表面蛋白聚糖粘連蛋白聚糖134糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖8細(xì)胞內(nèi)蛋白聚糖（絲甘蛋白聚糖）

簡(jiǎn)介：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作一、驗(yàn)室的常規(guī)儀器、設(shè)備一溫度控制系統(tǒng)1冰箱根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級(jí)別的冰箱，最常使用的有4℃、20℃、80℃冰箱。4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。80℃適合某些長(zhǎng)期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。010℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。2液氮罐有些實(shí)驗(yàn)材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長(zhǎng)期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個(gè)液氮罐（196℃）具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)。3培養(yǎng)箱37℃恒溫箱用于細(xì)菌的固體培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細(xì)胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5），用來(lái)維持培養(yǎng)液的酸度（PH值）。37℃恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培養(yǎng)。4水浴鍋用于保溫。25100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn)，各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗(yàn)的保溫。25100℃水浴箱用于常規(guī)試驗(yàn)。5烘箱主用于烘干實(shí)驗(yàn)器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在4245℃的烤箱中進(jìn)行烘干。（二）水的凈化裝置隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多實(shí)驗(yàn)對(duì)水純度的要求越來(lái)越高。PH試紙只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的PH值的粗略估計(jì)。而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的PH值，需精確度高（小數(shù)點(diǎn)后兩位）的PH計(jì)。4OD值測(cè)量光密度、分光光度計(jì)是利用物質(zhì)在可見(jiàn)光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來(lái)鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測(cè)量?jī)x表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標(biāo)之一，通過(guò)所產(chǎn)生的單色光而測(cè)定某一溶液對(duì)該單色光的吸收值，利用它可進(jìn)行核酸溶液定量和純度的初步判斷。（五）離心機(jī)離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因?yàn)楦鞣N物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異，可利用強(qiáng)大的離心力場(chǎng)，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機(jī)?？晒┥儆?05ML到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，包括收集和分離細(xì)胞、細(xì)胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同，可分為以下幾種類型1普通離心機(jī)最大轉(zhuǎn)速6000RM，最大離心力6000G①醫(yī)用或臺(tái)式離心機(jī)是離心機(jī)中最簡(jiǎn)單而廉價(jià)的，最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì)，如紅細(xì)胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細(xì)菌等。②低速冷凍離心機(jī)主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)菌的沉淀和收集等。2高速離心機(jī)最大轉(zhuǎn)速25000RM，最大離心力89000G有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。3超速離心機(jī)最大轉(zhuǎn)速9000RM，最大離心力694000G。4臺(tái)式超速離心機(jī)最大轉(zhuǎn)速12000RM，最大離心力625000G。（六）超凈工作臺(tái)內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75乙醇等滅菌的設(shè)備，是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣，經(jīng)過(guò)低、中效的過(guò)濾器后，通過(guò)工作臺(tái)面，使實(shí)驗(yàn)操作區(qū)域成為無(wú)菌的環(huán)境。超凈臺(tái)按氣流方向的不同大致有幾種類型

簡(jiǎn)介：1第二章染色體與DNA染色體（染色體（CHROMOSOME）是細(xì)胞在有絲分裂時(shí)遺傳物質(zhì)存在的特定形式，是間期細(xì)胞）是細(xì)胞在有絲分裂時(shí)遺傳物質(zhì)存在的特定形式，是間期細(xì)胞染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密包裝的結(jié)果。染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密包裝的結(jié)果。真核生物的染色體在細(xì)胞生活周期的大部分時(shí)間里都是以染色質(zhì)真核生物的染色體在細(xì)胞生活周期的大部分時(shí)間里都是以染色質(zhì)CHROMATIN的形式的形式存在的。存在的。染色質(zhì)是一種纖維狀結(jié)構(gòu)，叫做染色質(zhì)絲，它是由最基本的單位染色質(zhì)是一種纖維狀結(jié)構(gòu)，叫做染色質(zhì)絲，它是由最基本的單位核小體核小體NUCLEOSOME成串排列而成的。成串排列而成的。原核生物原核生物PROKARYOTEDNA形成一系列的環(huán)狀附著在非組蛋白上形成類核。形成一系列的環(huán)狀附著在非組蛋白上形成類核。染色體由DNA和蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)由非組蛋白和組蛋白（H1H2AH2BH3H4）DNA和組蛋白構(gòu)成核小體。組蛋白的一般特性組蛋白的一般特性P24①進(jìn)化上的保守性②無(wú)組織特異性③肽鏈氨基酸分布的不對(duì)稱性堿性氨基酸集中分布在N端的半條鏈上。④組蛋白的可修飾性甲基化、乙基化、磷酸化及ADP核糖基化等。⑤H5組蛋白的特殊性富含賴氨酸（24）鳥類、魚類及兩棲類紅細(xì)胞染色體不含H1而帶有H5組蛋白的可修飾性組蛋白的可修飾性在細(xì)胞周期特定時(shí)間可發(fā)生甲基化、乙?；?、磷酸化和在細(xì)胞周期特定時(shí)間可發(fā)生甲基化、乙?；⒘姿峄虯DP核糖基化等。核糖基化等。H3、H4修飾作用較普遍，修飾作用較普遍，H2B有乙?；饔?、有乙酰化作用、H1有磷酸化作用有磷酸化作用。所有這些修飾作用都有一個(gè)共同的特點(diǎn)，即降低組蛋白所攜帶的正電荷。這些組蛋所有這些修飾作用都有一個(gè)共同的特點(diǎn)，即降低組蛋白所攜帶的正電荷。這些組蛋白修飾的意義一是改變?nèi)旧w的結(jié)構(gòu)，直接影響轉(zhuǎn)錄活性；二是核小體表面發(fā)生白修飾的意義一是改變?nèi)旧w的結(jié)構(gòu)，直接影響轉(zhuǎn)錄活性；二是核小體表面發(fā)生改變，使其他調(diào)控蛋白易于和染色質(zhì)相互接觸，從而間接影響轉(zhuǎn)錄活性。改變，使其他調(diào)控蛋白易于和染色質(zhì)相互接觸，從而間接影響轉(zhuǎn)錄活性。2、DNA1DNA的變性和復(fù)性的變性和復(fù)性■變性（變性（DENATURATIONDNA雙鏈的氫鍵斷裂，最后完全變成單鏈的過(guò)程稱為變性。雙鏈的氫鍵斷裂，最后完全變成單鏈的過(guò)程稱為變性。■增色效應(yīng)增色效應(yīng)HYPERCHROMATICEFFECT在變性過(guò)程中，在變性過(guò)程中，260NM紫外線吸收值先緩慢上紫外線吸收值先緩慢上升，當(dāng)達(dá)到某一溫度時(shí)驟然上升，稱為增色效應(yīng)。升，當(dāng)達(dá)到某一溫度時(shí)驟然上升，稱為增色效應(yīng)?！鋈诮鉁囟龋ㄈ诮鉁囟龋∕ELTINGTEMPERATURE，TM變性過(guò)程紫外線吸收值增加的中點(diǎn)稱為變性過(guò)程紫外線吸收值增加的中點(diǎn)稱為融解溫度。融解溫度。生理?xiàng)l件下為生理?xiàng)l件下為8595℃影響因素影響因素GC含量，含量，PH值，離子強(qiáng)度，尿素，甲酰胺等值，離子強(qiáng)度，尿素，甲酰胺等■復(fù)性（復(fù)性（RENATURATION熱變性的熱變性的DNA緩慢冷卻，單鏈恢復(fù)成雙鏈。緩慢冷卻，單鏈恢復(fù)成雙鏈?！鰷p色效應(yīng)（減色效應(yīng)（HYPOCHROMATICEFFECT隨著隨著DNA的復(fù)性，的復(fù)性，260NM紫外線吸收值降紫外線吸收值降低的現(xiàn)象。低的現(xiàn)象。2C值反常現(xiàn)象（值反?，F(xiàn)象（CVALUEPARADOXC值是一種生物的單倍體基因組值是一種生物的單倍體基因組DNA的總量。的總量。真核細(xì)胞基因組的最大特點(diǎn)是它含有大量的重復(fù)序列，而且功能真核細(xì)胞基因組的最大特點(diǎn)是它含有大量的重復(fù)序列，而且功能DNA序列大多被序列大多被不編碼蛋白質(zhì)的非功能不編碼蛋白質(zhì)的非功能DNA所隔開(kāi)，這就是著名的所隔開(kāi)，這就是著名的“C值反?，F(xiàn)象值反常現(xiàn)象”。（四）核小體（四）核小體NUCLEOSOME用于包裝染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)單位，是由用于包裝染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)單位，是由DNA鏈纏繞一個(gè)組鏈纏繞一個(gè)組33、引物、引物DNA的合成需要一段的合成需要一段RNA鏈作為引物鏈作為引物4、引物合成酶（引發(fā)酶）此酶以、引物合成酶（引發(fā)酶）此酶以DNA為模板合成一段為模板合成一段RNA這段這段RNA作為合成作為合成DNA的引物（的引物（PRIMER。實(shí)質(zhì)是以。實(shí)質(zhì)是以DNA為模板的為模板的RNA聚合酶。聚合酶。5、DNA聚合酶聚合酶以DNA為模板的為模板的DNA合成酶合成酶●以四種脫氧核苷酸三磷酸為底物以四種脫氧核苷酸三磷酸為底物●反應(yīng)需要有模板的指導(dǎo)反應(yīng)需要有模板的指導(dǎo)●反應(yīng)需要有反應(yīng)需要有3OH存在存在●DNA鏈的合成方向?yàn)殒湹暮铣煞较驗(yàn)?3性質(zhì)性質(zhì)聚合酶聚合酶Ⅰ聚合酶聚合酶Ⅱ聚合酶聚合酶Ⅲ35外切活性外切活性53外切活性外切活性53聚合活性聚合活性中很低很低很高很高新生鏈合成新生鏈合成聚合酶聚合酶Ⅰ主要是對(duì)主要是對(duì)DNA損傷的修復(fù)；以及在損傷的修復(fù)；以及在DNA復(fù)制時(shí)切除復(fù)制時(shí)切除RNA引物并填補(bǔ)其引物并填補(bǔ)其留下的空隙。留下的空隙。聚合酶聚合酶Ⅱ修復(fù)紫外光引起的修復(fù)紫外光引起的DNA損傷損傷聚合酶聚合酶ⅢDNA復(fù)制的主要聚合酶，還具有復(fù)制的主要聚合酶，還具有3→5’外切酶的校對(duì)功能，提高外切酶的校對(duì)功能，提高DNA復(fù)制的保真性制的保真性6、DNA連接酶（連接酶（1967年發(fā)現(xiàn)）若雙鏈年發(fā)現(xiàn)）若雙鏈DNA中一條鏈有切口，一端是中一條鏈有切口，一端是3’OH，另一端是另一端是5’磷酸基，連接酶可催化這兩端形成磷酸二酯鍵，而使切口連接。磷酸基，連接酶可催化這兩端形成磷酸二酯鍵，而使切口連接。但是它不能將兩條游離的但是它不能將兩條游離的DNA單鏈連接起來(lái)單鏈連接起來(lái)DNA連接酶在連接酶在DNA復(fù)制、損傷修復(fù)、重組等過(guò)程中起重要作用復(fù)制、損傷修復(fù)、重組等過(guò)程中起重要作用7、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶DNATOPISOMERASE拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶使使DNA一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，作用是松解負(fù)超螺旋。主要集中一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，作用是松解負(fù)超螺旋。主要集中在活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，同轉(zhuǎn)錄有關(guān)。例大腸桿菌中的在活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，同轉(zhuǎn)錄有關(guān)。例大腸桿菌中的Ε蛋白蛋白拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ該酶能暫時(shí)性地切斷和重新連接雙鏈該酶能暫時(shí)性地切斷和重新連接雙鏈DNA，作用是將負(fù)超螺旋引入，作用是將負(fù)超螺旋引入DNA分子。同復(fù)制有關(guān)。例大腸桿菌中的分子。同復(fù)制有關(guān)。例大腸桿菌中的DNA旋轉(zhuǎn)酶旋轉(zhuǎn)酶8、DNA解螺旋酶解螺旋酶解鏈酶（解鏈酶（DNAHELICASE通過(guò)水解通過(guò)水解ATP獲得能量來(lái)解開(kāi)雙鏈獲得能量來(lái)解開(kāi)雙鏈DNA。ECOLI中的中的REP蛋白就是解螺旋酶，還有解螺旋酶蛋白就是解螺旋酶，還有解螺旋酶I、II、III。REP蛋白沿蛋白沿3’5’移動(dòng)，而解螺旋酶移動(dòng)，而解螺旋酶I、II、III沿5’3’移動(dòng)。移動(dòng)。9、單鏈結(jié)合蛋白、單鏈結(jié)合蛋白SSBPSINGLESTRBINDINGPROTEIN穩(wěn)定已被解開(kāi)的穩(wěn)定已被解開(kāi)的DNA單鏈，單鏈，阻止復(fù)性和保護(hù)單鏈不被核酸酶降解。阻止復(fù)性和保護(hù)單鏈不被核酸酶降解。（三）（三）DNA的復(fù)制過(guò)程（大腸桿菌為例）的復(fù)制過(guò)程（大腸桿菌為例）雙鏈的解開(kāi)雙鏈的解開(kāi)RNA引物的合成引物的合成DNA鏈的延伸鏈的延伸切除切除RNA引物，填補(bǔ)缺口，連接相鄰的引物，填補(bǔ)缺口，連接相鄰的DNA片段片段1、雙鏈的解開(kāi)、雙鏈的解開(kāi)FTJU制有特定的起始位點(diǎn)，叫做復(fù)制原點(diǎn)。制有特定的起始位點(diǎn)，叫做復(fù)制原點(diǎn)。I或O）、富含、富含A、T的區(qū)段。的區(qū)段。

簡(jiǎn)介：臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)練習(xí)題及答案練習(xí)題及答案一名詞解釋1、基因能夠表達(dá)和產(chǎn)生蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列是決定遺傳性狀的功能單位2、端粒以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒該結(jié)構(gòu)是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的一種復(fù)合體僅在真核細(xì)胞染色體末端存在3、啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列4、增強(qiáng)子位于真核基因中遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)能明顯增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄效率的特殊DNA序列它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄基因的上游或下游也可相距靶基因較遠(yuǎn)5、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯等一系列過(guò)程合成特定的蛋白質(zhì)進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過(guò)程6、信息分子調(diào)節(jié)細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)其中由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞間信息分子而在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)信息分子7、受體是存在于靶細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合進(jìn)而發(fā)生生物學(xué)效應(yīng)的的特殊蛋白質(zhì)8、分子克隆在體外對(duì)DNA分子按照即定目的和方案進(jìn)行人工重組將重組分子導(dǎo)入合適宿主使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖以獲得該DNA分子的大量拷貝9、載體能在連接酶的作用下和外源DN段連接并運(yùn)送DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子當(dāng)促使變性的因素解除后兩條DNA鏈又可以通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)21、退火指將溫度降至引物的TM值左右或以下引物與DNA摸板互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成雜交鏈22、定量PCR基因表達(dá)涉及的轉(zhuǎn)錄水平的研究常需要對(duì)MRNA進(jìn)行定量測(cè)定對(duì)此采用的PCR技術(shù)就叫定量PCR23、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯等一系列過(guò)程合成特定的蛋白質(zhì)進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過(guò)程24、基因治療一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法25、管家基因在生物體生命的全過(guò)程都是必須的且在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因26、SD序列轉(zhuǎn)錄出的MRNA要進(jìn)入核糖體上進(jìn)行翻譯需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌16SRRNA3末端富含嘧啶的序列互補(bǔ)是核糖體的識(shí)別位點(diǎn)27、核酸探針探針是指能與某種大分子發(fā)生特異性相互作用并在相互作用之后可以檢測(cè)出來(lái)的生物大分子核酸探針是指能識(shí)別特異堿基順序的帶有標(biāo)記的一段DNA或RNA分子28、周期蛋白是一類呈細(xì)胞周期特異性或時(shí)相性表達(dá)累積與分解的蛋白質(zhì)它與周期素依賴性激酶共同影響細(xì)胞周期的運(yùn)行二問(wèn)答題1、影響DNA穩(wěn)定性的因素有哪些

簡(jiǎn)介：分子生物學(xué)技術(shù),分子雜交與印跡技術(shù)MOLECULARHYBRIDIZATIONANDBLOTTINGTECHNIQUE,核酸分子雜交NUCLEICACIDHYBRIDIZATION在DNA復(fù)性過(guò)程中，如果把不同DNA單鏈分子放在同一溶液中，或把DNA與RNA放在一起，只要在DNA或RNA的單鏈分子之間有一定的堿基配對(duì)關(guān)系，就可以在不同的分子之間形成雜化雙鏈HETERODUPLEX。,一、分子雜交與印跡技術(shù)的原理,（一）印跡技術(shù),利用各種物理方法使電泳膠中的生物大分子轉(zhuǎn)移到NC等各種膜上，使之成為固相化分子。這一技術(shù)類似于用吸墨紙吸收紙張上的墨跡，因此稱之為“BLOTTING”，譯為印跡技術(shù)。,用放射性核素、生物素或熒光染料標(biāo)記其末端或全鏈的已知序列的多聚核苷酸鏈被稱為“探針”，探針可以與固定在NC膜上的核苷酸結(jié)合，判斷是否有同源的核酸分子存在。,（二）探針技術(shù),二、印跡技術(shù)的類別及應(yīng)用,（一）DNA印跡SOUTHERNBLOTTING,（二）RNA印跡NORTHERNBLOTTING,（三）蛋白質(zhì)的印跡WESTERNBLOTTING,用于基因組DNA、重組質(zhì)粒和噬菌體的分析。,用于RNA的定性定量分析。,用于蛋白質(zhì)定性定量及相互作用研究。,其他斑點(diǎn)印跡DOTBLOTTING原位雜交INSITUHYBRIDIZATIONDNA點(diǎn)陣DNAARRAYDNA芯片技術(shù)DNACHIP,三種印跡技術(shù)的比較,分子雜交實(shí)驗(yàn),①,②,③,,,放射自顯影照片,DNA芯片技術(shù),PCR技術(shù)的原理與應(yīng)用THEPRINCIPLEANDAPPLICATIONOFPCRTECHNOLOGY,,5?,PRIMER1,,5?,PRIMER2,,,,5?,5?,TEMPLATEDNA,,一、PCR技術(shù)的工作原理,,,,,,,,,,,,,,PCR技術(shù)原理示意圖,PCR的基本反應(yīng)步驟,變性95?C,延伸72?C,退火TM5?C,,,,,模板DNA特異性引物耐熱DNA聚合酶DNTPSMG2,PCR體系基本組成成分,利用特異性引物以CDNA或基因組DNA為模板獲得已知目的基因片段,或與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)相結(jié)合，直接以組織和細(xì)胞的MRNA為模板獲得目的片段；利用簡(jiǎn)并引物從CDNA文庫(kù)或基因組文庫(kù)中獲得序列相似的基因片段；利用隨機(jī)引物從CDNA文庫(kù)或基因組文庫(kù)中克隆基因。,二、PCR技術(shù)的主要用途,（一）目的基因的克隆,利用PCR技術(shù)可以隨意設(shè)計(jì)引物在體外對(duì)目的基因片段進(jìn)行嵌和、缺失、點(diǎn)突變等改造。,PCR技術(shù)高度敏感，對(duì)模板DNA的量要求很低，是DNA和RNA微量分析的最好方法。,（三）DNA和RNA的微量分析,（二）基因突變,將PCR技術(shù)引入DNA序列測(cè)定，使測(cè)序工作大為簡(jiǎn)化，也提高了測(cè)序的速度；待測(cè)DNA片段既可克隆到特定的載體后進(jìn)行序列測(cè)定，也可直接測(cè)定。,PCR與其他技術(shù)的結(jié)合可以大大提高基因突變檢測(cè)的敏感性。,（四）DNA序列測(cè)定,（五）基因突變分析,逆轉(zhuǎn)錄PCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR，RTPCR是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。RTPCR是目前從組織或細(xì)胞中獲得目的基因以及對(duì)已知序列的RNA進(jìn)行定性及半定量分析的最有效方法。,（一）逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù),三、幾種重要的PCR衍生技術(shù),原位PCRINSITUPCR是在組織切片或細(xì)胞涂片上的單個(gè)細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的PCR反應(yīng)，然后用特異性探針進(jìn)行原位雜交，即可檢出待測(cè)DNA或RNA是否在該組織或細(xì)胞中存在。原位PCR方法彌補(bǔ)了PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)的不足，是將目的基因的擴(kuò)增與定位相結(jié)合的一種最佳方法。,（二）原位PCR技術(shù),（三）實(shí)時(shí)PCR技術(shù),實(shí)時(shí)PCRREALTIMEPCR技術(shù)通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程中的產(chǎn)物量，消除了產(chǎn)物堆積對(duì)定量分析的干擾，亦被稱為定量PCR。,實(shí)時(shí)PCR技術(shù)原理,實(shí)時(shí)PCR分類,圖203TAQMAN探針?lè)▽?shí)時(shí)PCR原理示意圖,基因文庫(kù)GENELIBRARY,基因組DNA文庫(kù)GENOMICDNALIBRARYCDNA文庫(kù)CDNALIBRARY,基因文庫(kù)GENELIBRARY,是指一個(gè)包含了某一生物體全部DNA序列的克隆群體。,一、基因組DNA文庫(kù),基因組DNA文庫(kù)是指生物的基因組DNA的信息（包括所有的編碼區(qū)和非編碼區(qū)）以DNA片段形式貯存的克隆群體。,用于構(gòu)建基因組文庫(kù)的載體有?噬菌體、粘粒和酵母人工染色體等。,基因組文庫(kù)和CDNA文庫(kù)的構(gòu)建和篩選,第一輪篩選,第二輪篩選,第三輪篩選,基因組文庫(kù)篩選結(jié)果舉例,CDNA文庫(kù)是包含某一組織細(xì)胞在一定條件下所表達(dá)的全部MRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄而合成的CDNA序列的克隆群體，它以CDNA片段的形式貯存著該組織細(xì)胞的基因表達(dá)信息。,二、CDNA文庫(kù),生物芯片技術(shù)BIOLOGICALCHIPTECHNIQUE,是指將許多特定的DNA片段有規(guī)律地緊密排列固定于單位面積的支持物上，然后與待測(cè)的熒光標(biāo)記樣品進(jìn)行雜交，雜交后用熒光檢測(cè)系統(tǒng)等對(duì)芯片進(jìn)行掃描，通過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)每一位點(diǎn)的熒光信號(hào)做出檢測(cè)、比較和分析，從而迅速得出定性和定量的結(jié)果。該技術(shù)亦被稱作DNA微陣列DNAMICROARRAY。,一、基因芯片,基因芯片GENECHIP,基因芯片工作流程示意圖,是將高度密集排列的蛋白分子作為探針點(diǎn)陣固定在固相支持物上，當(dāng)與待測(cè)蛋白樣品反應(yīng)時(shí)，可捕獲樣品中的靶蛋白，再經(jīng)檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)靶蛋白進(jìn)行定性和定量分析的一種技術(shù)。,二、蛋白質(zhì)芯片,蛋白質(zhì)分子間的親和反應(yīng),蛋白質(zhì)芯片PROTEINCHIP,蛋白質(zhì)芯片作用原理,生物大分子相互作用研究技術(shù)THEMETHODOFPROTEINPROTEINANDPROTEINDNAINTERACTIONSTUDY,一、蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù),酵母雙雜交各種親和分析（標(biāo)簽蛋白沉淀、免疫共沉淀等）熒光共振能量轉(zhuǎn)換效應(yīng)分析噬菌體顯示系統(tǒng)篩選,常用蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù),標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)是一個(gè)基于親和色譜原理的、分析蛋白質(zhì)體外直接相互作用的方法。,（一）標(biāo)簽蛋白沉淀,標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)主要用于證明兩種蛋白分子是否存在直接物理結(jié)合、分析兩種分子結(jié)合的具體結(jié)構(gòu)部位及篩選細(xì)胞內(nèi)與融合蛋白相結(jié)合的未知分子。,標(biāo)簽融合蛋白沉淀實(shí)驗(yàn)流程示意圖,（二）酵母雙雜交技術(shù)的基本原理和用途,酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用,證明兩種已知基因序列的蛋白質(zhì)可以相互作用的生物信息學(xué)推測(cè)。分析已知存在相互作用的兩種蛋白質(zhì)分子的的相互作用功能結(jié)構(gòu)域或關(guān)鍵的氨基酸殘基。將擬研究的蛋白質(zhì)的編碼基因與BD基因融合成為“誘餌”表達(dá)質(zhì)粒，可以篩選AD基因融合的“獵物”基因表達(dá)文庫(kù)，篩選未知的相互作用蛋白質(zhì)。,（三）免疫共沉淀技術(shù)的基本原理和用途,免疫沉淀（IMMUNOPRECIPITATIONIP）免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來(lái)。免疫共沉淀（COIMMUNOPRECIPITATION，COIP）免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。COIP與質(zhì)譜分析以細(xì)胞內(nèi)源性靶蛋白為誘餌，用抗靶蛋白抗體與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行免疫共沉淀純化靶蛋白免疫復(fù)合物，凝膠電泳分離后，質(zhì)譜鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白,免疫沉淀原理圖解,免疫共沉淀原理圖解,免疫共沉淀原理圖解,蛋白A，蛋白B抗A抗體C進(jìn)行洗脫抗B抗體D進(jìn)行驗(yàn)證,COIP與質(zhì)譜分析流程,,電泳遷移率變動(dòng)測(cè)定ELECTROPHORETICMOBILITYSHIFTASSAY，EMSA或稱凝膠遷移變動(dòng)實(shí)驗(yàn)GELSHIFTASSAY最初用于研究DNA結(jié)合蛋白與相應(yīng)DNA序列間的相互作用，可用于定性和定量分析，已經(jīng)成為轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法。目前這一技術(shù)也被用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定RNA序列間的相互作用。,二、DNA蛋白質(zhì)相互作用分子分析技術(shù),（一）電泳遷移率變動(dòng)測(cè)定,凝膠遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖,染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)CHROMATINIMMUNOPRECIPITATIONASSAY,CHIP是目前可以研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的主要方法。,（二）染色質(zhì)免疫沉淀法,染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)流程及結(jié)果示意圖,二、RNA蛋白質(zhì)相互作用分子分析技術(shù),RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RNABINDINGPROTEINIMMUNOPRECIPITATION，RIP），是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)。應(yīng)用范圍研究蛋白與DNA動(dòng)態(tài)作用研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)之間的關(guān)系研究蛋白與RNA的相互作用,激光共聚集顯微鏡應(yīng)用技術(shù)LASERSCANNINGCONFOCALMICROSCOPYLSCM,激光經(jīng)放大、分光后由物鏡聚焦于焦平面上，同時(shí)，焦平面上被激光掃描的點(diǎn)F所發(fā)出的一定波長(zhǎng)的熒光通過(guò)檢測(cè)針孔光欄達(dá)到檢測(cè)器，并成像于顯示器上，得到相應(yīng)的熒光圖象。,激光共聚焦顯微鏡工作原理示意圖,人眼及各類顯微鏡分辯率,人眼分辯率020MM光學(xué)顯微鏡分辯率025UM共焦顯微鏡分辯率018UM電子顯微鏡分辯率020NM激光共聚焦顯微鏡有四個(gè)熒光通道，一個(gè)透射光通道,激光共聚焦顯微鏡的應(yīng)用,定位、定量三維重組動(dòng)態(tài)測(cè)量?活細(xì)胞或組織內(nèi)游離CA2分布和濃度的變化測(cè)量MG2、ZN、NA、K?自由基的檢測(cè)?藥物進(jìn)入細(xì)胞的動(dòng)態(tài)過(guò)程、定位分布及定量?蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)位活細(xì)胞內(nèi)H濃度（PH值）的測(cè)量線粒體膜電位的測(cè)量熒光漂白恢復(fù)（FRAP）的測(cè)量籠鎖解籠鎖的測(cè)量熒光能量共振轉(zhuǎn)移（FRET）的測(cè)量其他應(yīng)用,THANKYOU,

簡(jiǎn)介：福建師范大學(xué)分子生物學(xué)作業(yè)考核試題一名詞解釋（每小題2分，共20分）1內(nèi)含子2DNA后隨鏈3負(fù)超螺旋4核仁組織者5SD序列6核小體7核糖體8啟動(dòng)子9終止子10DNA克隆二請(qǐng)選擇正確的選項(xiàng)（每小題15分，共45分）1234567891011121314151617181920212223242526272829301以下哪個(gè)是核蛋白（）A角蛋白B染色質(zhì)C組蛋白D蛋白聚糖2DNA中的一段5AGTCTGACT3序列等同于RNA中的哪一段（）A5AGUCUGACU3B5UGTCTGUTC3C5UCAGUCUGA3D5AGUCAGACU33DNA解鏈溫度是指（）AA260NM達(dá)到最大值時(shí)的溫度BA260NM達(dá)到最大值50％的溫度CDNA開(kāi)始解鏈時(shí)所需要的溫度DDNA完全解鏈時(shí)所需要的溫度41953年WATSON和CRICK提出（）A多核苷酸DNA鏈通過(guò)氫鍵連接成一個(gè)雙螺旋BDNA的復(fù)制是半保留的，常常形成親本－子代雙螺旋雜合鏈C三個(gè)連續(xù)的核苷酸代表一個(gè)遺傳密碼D遺傳物資通常是DNA而非RNA5以下哪一個(gè)在260NM波長(zhǎng)下具有最大的單位質(zhì)量吸收（）U，結(jié)果產(chǎn)生一個(gè)終止密碼子，因此在腸細(xì)胞中，脫輔基脂蛋白B只產(chǎn)生一個(gè)241KDA的截短的載脂蛋白B48，產(chǎn)生這種現(xiàn)象是因?yàn)椋ǎ┑慕Y(jié)果ARNA可變剪接BRNA編輯CRNA翻譯后加工D偶然突變14某限制性內(nèi)切酶酶切割5’GG↓AATTCC3’序列后產(chǎn)生（）A5’突出末端B3’突出末端C5’及3’突出末端D平末端15原核生物的起始氨基酸是（）A甲酰甲硫氨酸B甲硫氨酸C組氨酸D色氨酸16下面哪個(gè)結(jié)構(gòu)域是DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（）A螺旋轉(zhuǎn)角螺旋結(jié)構(gòu)域B螺旋環(huán)螺旋結(jié)構(gòu)域C亮氨酸拉鏈D酸性激活結(jié)構(gòu)域17DNA光復(fù)活修復(fù)中哪種酶起關(guān)鍵作用（）ADNA光解酶B烷基轉(zhuǎn)移酶CDNA糖基化酶DAP內(nèi)切核酸酶18轉(zhuǎn)化是（）A細(xì)菌吸收一個(gè)質(zhì)粒B細(xì)菌表達(dá)一個(gè)基因C細(xì)菌吸收一個(gè)噬菌體D從細(xì)菌中分離一個(gè)質(zhì)粒19一種細(xì)菌MRNA由360個(gè)核苷酸組成，它所編碼的蛋白質(zhì)長(zhǎng)度是（D）A約360個(gè)氨基酸B約1080個(gè)氨基酸C120個(gè)氨基酸D少于120個(gè)氨基酸20SV40基因組是（）A雙鏈線狀DNAB雙鏈環(huán)狀DNAC單鏈線狀DNAD單鏈環(huán)狀DNA21RNA由以下哪組堿基組成（）AG、T、C、ABU、T、C、A

簡(jiǎn)介：幻燈片1第十五章基因工程與分子生物學(xué)常用技術(shù)GEICENGINEERINGTHEPOPULARTECHNOLOGYINMOLECULARBIOLOGY分子生物學(xué)技術(shù)現(xiàn)已廣泛滲透到生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)等多個(gè)學(xué)科中，尤其推動(dòng)了基因工程分子生物學(xué)技術(shù)現(xiàn)已廣泛滲透到生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)等多個(gè)學(xué)科中，尤其推動(dòng)了基因工程的發(fā)展。的發(fā)展。對(duì)疾病的發(fā)病機(jī)制、診斷及藥物生產(chǎn)等領(lǐng)域取得了令人矚目的成就，對(duì)醫(yī)學(xué)的發(fā)展起對(duì)疾病的發(fā)病機(jī)制、診斷及藥物生產(chǎn)等領(lǐng)域取得了令人矚目的成就，對(duì)醫(yī)學(xué)的發(fā)展起著巨大的推動(dòng)作用。著巨大的推動(dòng)作用?；脽羝?第一節(jié)第一節(jié)第一節(jié)基因工程與基因重組基因工程與基因重組基因工程與基因重組GEICENGINEERINGGEICRECOMBINATION一、基因工程的基本概念一、基因工程的基本概念不同來(lái)源的不同來(lái)源的DNADNA分子可以通過(guò)磷酸二酯鍵連接形成重新組合的分子可以通過(guò)磷酸二酯鍵連接形成重新組合的DNADNA分子，稱為分子，稱為DNADNA重組。重組。將基因進(jìn)行克隆，并表達(dá)制備特定的產(chǎn)物，或定向改造細(xì)胞乃至生物個(gè)體的特性所將基因進(jìn)行克隆，并表達(dá)制備特定的產(chǎn)物，或定向改造細(xì)胞乃至生物個(gè)體的特性所用的方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為基因工程。用的方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為基因工程?；脽羝?一一工具酶工具酶工具酶工具酶1111限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶1111能夠切割能夠切割能夠切割能夠切割DNADNADNADNA中磷酸二酯鍵的酶稱核酸酶，其中有選擇地切割中磷酸二酯鍵的酶稱核酸酶，其中有選擇地切割中磷酸二酯鍵的酶稱核酸酶，其中有選擇地切割中磷酸二酯鍵的酶稱核酸酶，其中有選擇地切割DNADNADNADNA分子特異序列的分子特異序列的分子特異序列的分子特異序列的核酸酶，稱為限制性核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱限制性內(nèi)切酶。核酸酶，稱為限制性核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱限制性內(nèi)切酶。核酸酶，稱為限制性核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱限制性內(nèi)切酶。核酸酶，稱為限制性核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱限制性內(nèi)切酶。2222命名命名命名命名HINDⅢ屬系株序HAEMOPHILUSINFLUENZAED株流感嗜血桿菌流感嗜血桿菌D株的第三種酶株的第三種酶333識(shí)別特征識(shí)別特征識(shí)別特征識(shí)別特征具有多克隆位點(diǎn)。具有多克隆位點(diǎn)。易從宿主細(xì)胞中分離純化。易從宿主細(xì)胞中分離純化。有易被識(shí)別和篩選的標(biāo)志。有易被識(shí)別和篩選的標(biāo)志。2載體的選擇標(biāo)準(zhǔn)載體的選擇標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒噬菌體噬菌體噬菌體噬菌體粘粒粘粒粘粒粘粒病毒病毒病毒病毒3常用載體常用載體幻燈片81111質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒質(zhì)粒PLASPLASPLASPLAS

簡(jiǎn)介：【本講教育信息本講教育信息】一、教學(xué)內(nèi)容一、教學(xué)內(nèi)容選修1生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)踐【重點(diǎn)導(dǎo)學(xué)】蛋白質(zhì)的分離與純化從生物材料中提取某些特定成分分子生物學(xué)進(jìn)展與PCR技術(shù)【全面突破全面突破】知識(shí)點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)1蛋白質(zhì)的分離與純化蛋白質(zhì)的分離與純化1、蛋白質(zhì)的分離2、蛋白質(zhì)的純化方法①透析法蛋白質(zhì)分子不能通過(guò)半透膜（腸衣、玻璃紙、動(dòng)物膀胱膜等）的特性，可將待純化的蛋白質(zhì)溶液裝入半透膜制成的透析袋內(nèi)，再將透析袋放入透析液（緩沖液）中進(jìn)行透析。②離心沉淀法控制離心速率，使得分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)發(fā)生沉降分層，從而達(dá)到分離出不同蛋白質(zhì)的目的。幾點(diǎn)說(shuō)明1）膜的預(yù)處理必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液中，浸透后，取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過(guò)干。2）加樣樣品用量依樣品濃度、本身性質(zhì)、染色方法及檢測(cè)方法等因素決定。對(duì)血清蛋白質(zhì)的常規(guī)電泳分析，每厘米加樣線不超過(guò)2～3ΜL，相當(dāng)于60～80ΜG的蛋白質(zhì)。3）電泳可在室溫下進(jìn)行。電壓為25V／CM，電流為04～08MA／CM。4）染色一般蛋白質(zhì)染色常使用氨基黑和麗春紅，血漿蛋白用甲苯胺藍(lán)或過(guò)碘酸SCHIFF試劑，脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫酸染色。5）脫色與透明對(duì)水溶性染料應(yīng)用最普遍的脫色劑是5％醋酸水溶液。為了長(zhǎng)期保存或進(jìn)行光吸收掃描測(cè)定，可浸入冰醋酸無(wú)水乙醇37的透明液中?！镜湫屠}典型例題】例1、回答有關(guān)蛋白質(zhì)分離和純化的問(wèn)題（1）要獲得血清蛋白的粗制品，必須將含有檸檬酸鈉的血液進(jìn)行處理，然后將裝入透析袋中除去。（2）要獲得血紅蛋白，應(yīng)如何破碎紅細(xì)胞。（3）下圖為血清蛋白通過(guò)醋酸纖維薄膜的電泳圖譜，你認(rèn)為含量最多的蛋白質(zhì)是，含負(fù)電荷最多的球蛋白是，相對(duì)分子質(zhì)量最大的球蛋白是。（4）電泳是目前應(yīng)用最為普遍的蛋白質(zhì)的方法。解析解析本題考查蛋白質(zhì)分離和純化的基礎(chǔ)知識(shí)。答案答案（1）離心上清液小分子物質(zhì)（2）加蒸餾水使其脹破（3）清蛋白球蛋白Γ球蛋白（4）（分離）純化

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多分子生物學(xué)圖片18精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題1什么是C值、C值矛盾產(chǎn)生原因C值一種生物體的單倍體基因組DNA的總量。C值反?；蚪M的大小與基因組的復(fù)雜性之間缺乏一定的聯(lián)系。表現(xiàn)為低等動(dòng)物的C值大于高等動(dòng)物如兩棲類的C值大于哺乳類，肺魚的C值比哺乳動(dòng)物大10－15倍；同一門中的動(dòng)物C值變化很大如兩棲類中的C值變化很大，可相差100倍，家蠅的比果蠅的大6倍。原因許多的DNA序列不編碼蛋白質(zhì)。2什么是基因家族，基因簇，舉例說(shuō)明基因家族真核生物的基因組中許多來(lái)源相同，結(jié)構(gòu)相似、功能相關(guān)的一組基因。基因簇（GENECLUSTER）基因家族的各成員緊密成簇，排列成大段的串聯(lián)重復(fù)單位，定位于染色體的特殊區(qū)域。目前基因家族可分為三類①簡(jiǎn)單多基因家族5SRRNA基因家族②復(fù)雜多基因家族各個(gè)成員并不都是相同的如組蛋白基因家族，RRNA、TRNA基因家族③由發(fā)育階段控制的多基因家族人類珠蛋白的基因家族3真核生物染色體組裝的過(guò)程（1）每個(gè)核小體單位包括200BP左右的DNA、一個(gè)組蛋白八聚體、一分子H1，首先若干個(gè)核小體形成念珠狀結(jié)構(gòu)，形成10NM的核小體串珠結(jié)構(gòu)，這是染色質(zhì)包裝的一級(jí)結(jié)構(gòu)。（2）在有組蛋白H1存在的情況下，由直徑10NM的核小體串珠結(jié)構(gòu)螺旋盤繞，每圈6個(gè)核小體形成外徑30NM，內(nèi)徑10NM，螺距11NM的螺線管，這是染色質(zhì)包裝的二級(jí)結(jié)構(gòu)。（3）螺線管壓縮40倍形成超螺線管，這是包裝的三級(jí)結(jié)構(gòu)。（4）超螺線管進(jìn)一步壓縮成2－10UM的染色單體，這是四級(jí)結(jié)構(gòu)。染色體包裝的過(guò)程大約壓縮了8400倍。4原核與真核生物復(fù)制過(guò)程及其異同相同點(diǎn)⑴兩者都是半保留復(fù)制⑵兩者都是半不連續(xù)復(fù)制A型小溝寬淺，大溝變深。B型小溝窄，大溝寬。Z型大溝不存在，小溝窄而深。7在生命延續(xù)過(guò)程中作為遺傳信息的載體DNA是如何維持其高保真度的1DNAPOL的3’5’外切酶活性執(zhí)行校正活性。2DNAPOL只能從引物的3’端延伸DNA，需要RNA引物A、堿基配對(duì)協(xié)同性導(dǎo)致最初幾個(gè)堿基錯(cuò)配率高，且不易校正B、RNA引物最終被降解而避免錯(cuò)誤3后隨鏈的不連續(xù)合成因其有利于錯(cuò)配堿基的校正。4生物體還存在錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)。8何謂RECA蛋白有那些活性，在SOS系統(tǒng)中起何作用RECA蛋白是大腸桿菌RECA基因的產(chǎn)物，有三種活性DNA重組活性；與SSDNA結(jié)合活性；少數(shù)蛋白的PROTEINASE活性。其重組活性在正常情況下存在，而其蛋白酶活性只有在DNA復(fù)制受阻時(shí)才表現(xiàn)出來(lái)，而它的蛋白酶活性只作用于少數(shù)蛋白，LEXA蛋白就是其中之一，它可使LEX蛋白水解成兩個(gè)片段而失活。RECA蛋白在SOS系統(tǒng)中起核心作用⑴當(dāng)DNA正常復(fù)制時(shí)，RECA蛋白并不表現(xiàn)出蛋白酶活性，SOS系統(tǒng)關(guān)閉；⑵當(dāng)DNA復(fù)制受阻或損傷時(shí)一部分已經(jīng)存在于細(xì)胞中的RECA蛋白與SSDNA結(jié)合激活RECA蛋白的蛋白酶活性，將LEXA蛋白降解成兩個(gè)片段，SOS系統(tǒng)打開(kāi)；⑶當(dāng)修復(fù)完成以后，RECA蛋白失去了蛋白酶活性，LEXA蛋白又得以控制SOS系統(tǒng)基因的轉(zhuǎn)錄，使SOS系統(tǒng)關(guān)閉。9那些因素可引發(fā)突變生成作用并舉例說(shuō)明什么是增變基因⑴堿基類似物在DNA復(fù)制時(shí)滲入產(chǎn)生錯(cuò)義突變。⑵堿基的化學(xué)修飾在DNA復(fù)制時(shí)滲入產(chǎn)生錯(cuò)義突變。⑶嵌合劑的質(zhì)突變作用，結(jié)果產(chǎn)生移框突變⑷轉(zhuǎn)座成分的致突變作用⑸增變基因⑹紫外線的致突變作用，造成堿基替代、缺失、重復(fù)、移框的突變。增變基因生物體內(nèi)有些基因與整個(gè)基因組的突變頻率直接相關(guān)其突變時(shí)，整個(gè)基因組的突變頻率明顯上升。增變基因類別DNAPOLYMERASE相關(guān)基因3’5’校正功能突變錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的基因

簡(jiǎn)介：332華南理工大學(xué)2005年攻讀碩士學(xué)位研究生入學(xué)考試試卷（試卷上做答無(wú)效，請(qǐng)?jiān)诖痤}紙上做答，試后本卷必須與答題紙一同交回）科目名稱生物化學(xué)與分子生物學(xué)適用專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)共4頁(yè)第1頁(yè)一、一、名詞解釋名詞解釋（每題（每題2分，共分，共1010分）分）分子伴侶；反義鏈；核糖酶；等電聚焦；限制性酶圖譜二、單選題單選題（每題（每題2分，共分，共3030分）分）1、以下各種糖，哪一種屬于多糖A、蔗糖；B、麥芽糖；C、乳糖，D、糖原2、缺乏哪種維生素，易患夜盲癥A、維生素B；B、維生素D；C、維生素A；D、維生素C3、肝素、透明質(zhì)酸在動(dòng)物新陳代謝中均有重要功能，它們屬于以下哪一類A、蛋白質(zhì)B、糖C、脂肪D、維生素4、根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物的方法是A、凝膠過(guò)濾，B、親和層析，C、離子交換層析，D、鹽析5、氨基酸殘基并不是均勻的分布在所有類型的二級(jí)結(jié)構(gòu)中，在Α螺旋內(nèi)部最不可能出現(xiàn)的氨基酸殘基是A、PHEB、PROC、HISD、ARG6、蛋白質(zhì)變性后，以下哪種現(xiàn)象不會(huì)出現(xiàn)A、生物活性喪失；B、一些側(cè)鏈基團(tuán)暴露C、氨基酸順序遭破壞D、生化性質(zhì)改變7、有關(guān)米氏常數(shù)描述錯(cuò)誤的是A、不同的酶，KM值不同，B、KM值越小，表示酶對(duì)底物的親和力越小。C、不同的酶促反應(yīng)，KM值不同，D、KM值越小，表示酶對(duì)底物的親和力越大。第3頁(yè)D、TFIIB使TFIID－DNA復(fù)合體穩(wěn)定三、三、填空填空（每空（每空1分，共分，共2525分）分）1DNA序列“PAGATTAAGCC”的反向互補(bǔ)序列是______。2生物膜的主要組分是______、______和脂質(zhì)。3蛋白質(zhì)的最大光吸收一般在______波長(zhǎng)處，而核酸的最大光吸收一般在______處。4蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的基本類型主要有______、______、______等。5當(dāng)ALA（PI＝602）、SER（PI＝568）、PHE（PI＝548）、ASP（PI＝297）的混合物在PH40下進(jìn)行紙電泳，泳向正極的有______，泳向負(fù)極的有______。6核酸主要有______和______兩種，由于它們的______不同，所以______在酸性條件下更穩(wěn)定。7一分子葡萄糖在無(wú)氧情況下酵解生成______，并凈得______分子ATP。8分離蛋白質(zhì)混合物的各種方法主要根據(jù)蛋白質(zhì)在溶液中的下列性質(zhì)，即______、______、______、______，以及對(duì)其它分子的生物學(xué)親和力。9逆轉(zhuǎn)錄酶是一種多功能酶，兼有三種酶的活力即______、______和核糖核酸酶H的活力。10真核生物RNA聚合酶有三種，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄58S、18S、28SRRNA的是______，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄MRNA前體的是______，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄TRNA的是______。四、四、判斷判斷（填V（是）或（是）或X（非）（非），每題每題1分，共分，共2020分）分）1在糖的結(jié)構(gòu)特征描述中，“D”、“L”是指構(gòu)型，而“＋”、“－”指旋光方向，“D”與“＋”，“L”與“－”并無(wú)必然聯(lián)系。（）2從各種生物體中發(fā)現(xiàn)的氨基酸種類只有二十種。（）3用陽(yáng)離子交換層析分離氨基酸混合物時(shí)，用PH30的緩沖液洗脫，若不考慮其它因素，氨基酸被洗脫下來(lái)的順序是酸性－中性－堿性。（）4所有酶都需結(jié)合輔助因子后才表現(xiàn)出酶的活性。（）5對(duì)同一種酶來(lái)說(shuō)，比活力愈高，表明酶愈純。（）6酶促反應(yīng)速度總是與底物濃度、與酶量成正比。（）7定點(diǎn)誘變技術(shù)為研究酶的結(jié)構(gòu)與功能提供了有力途徑。（）8在生物圈，能量只能從光養(yǎng)生物到化養(yǎng)生物，而物質(zhì)卻能在這兩類生物之間循環(huán)。（）9真核生物初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以通過(guò)不同的剪接機(jī)理，產(chǎn)生多個(gè)MRNA分子。（）10所有生物的遺傳密碼完全一樣。（）11大腸桿菌中，復(fù)制叉以每秒500個(gè)堿基對(duì)的速度向前移動(dòng)，復(fù)制叉前的DNA以大約3000轉(zhuǎn)分的速度旋轉(zhuǎn)。（）12TRNAFMET的反密碼子是TAC。（）13核糖體上蛋白質(zhì)生物合成時(shí)，催化肽鍵合成的是核糖體RNA。（）